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实验目的:脂质体作为一种靶向药物载体,具有类似细胞的结构,在体内可以改变被包封药物的分布,并具有缓释效果,从而减少药物的剂量和降低药物的毒性,提高药物的治疗指数,为提高本实验室已合成的新化合物茶氯香酰胺(TClC)的溶解性,增加其在体内外药效和提高生物利用度,本研究赋予其脂质体剂型(TClC-L)。此外,为进一步提高肿瘤抑制作用,实验设计茶氯香酰胺与顺铂联合应用。鉴于顺铂(DDP)属周期非特异性抗癌药,抗瘤谱较广,但在体内的毒性较大,为进一步提高其抗肿瘤活性,本研究还制备了茶氯香酰胺与顺铂复方脂质体(TClC+DDP-L),评估了DDP-L(顺铂脂质体)和 TClC+DDP-L对人乳腺癌MCF-7细胞生长和迁移的影响,探索了它们作用的分子机制。 实验方法: 1.采用薄膜分散法方法分别制备TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L,对制备的脂质体处方工艺进行了研究和质量评价; 2.通过MTT法检测TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L对人乳腺癌MCF-7细胞生长的影响; 3.使用流式细胞术检测TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响; 4.用Transwellchamber法观察TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L对人乳腺癌MCF-7细胞迁移的影响; 5.应用蛋白印迹技术检测TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L对人乳腺癌MCF-7细胞中与生长和迁移相关的蛋白的表达影响,并研究了药物可能作用的分子机制; 实验结果: 1.得到了TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L,脂质体质量评估符合实验要求。 2. MTT结果表明:三种脂质体 TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L对人乳腺癌MCF-7细胞的生长均表现出抑制作用,同剂量下细胞给药TClC+DDP-L抑制作用更加显著,并呈现出显著的剂量—时间依赖关系。 3.流式细胞术分析显示:三种脂质体TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L均可促进人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。 4.Transwellchamber检测结果表明:三种脂质体TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L均可以降低人乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力。 5.蛋白印迹法结果表明:三种脂质体TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L均能够上调抑制生长和诱导凋亡的相关蛋白因子Bax、PARP-1和caspase-3的表达水平,下调促进生长和迁移以及抗凋亡的相关蛋白因子 VEGFR1、VEGFR2、Bcl-2、Akt和ER-α蛋白的表达水平。 实验结论: TClC-L,DDP-L和 TClC+DDP-L均对人乳腺癌MCF-7细胞的生长和迁移有显著的抑制作用,TClC+DDP-L的抑制作用最强;促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长和迁移可能是其作用重要的分子机制,其中涉及到的蛋白因子包括Bcl-2、Bax、PARP-1、caspase-3、VEGFR1、VEGFR2、Akt和ER-α。 本课题的创新点: 1首次制备了TClC-L,并和DDP制备成TClC+DDP-L。 2首次探究了化合物TClC-L和TClC+DDP-L对人乳腺癌MCF-7细胞生长和迁移的抑制作用。 3初步证明了TClC-L和TClC+DDP-L抑制人乳腺癌MCF-7细胞生长和迁移可能作用的分子机制,并证实了其发挥作用所涉及到的重要蛋白因子。