论文部分内容阅读
[摘要]目的：研究4-氨基-1,8-萘二胺(4-ANI)对人肝癌HepG2田胞株体外的放射增敏作用并探讨其可能存在的周期作用机制。方法：使用DMEM体外培养人肝癌HepG2细胞株,采用CCK-8试剂盒测定不同浓度4-ANI(0、2.5、5、7.5、10、20、30μM)作用人肝癌HepG2细胞株12h、24h、48h后的增殖情况,绘制细胞存活率曲线,选用较低细胞毒性药物浓度进行后续增敏实验。通过细胞克隆形成实验,分别观察1Oummol/L20ummol/L4-ANI浓度组对人肝癌HepG2细胞株放疗敏感性的影响,通过多靶单击模型和线性二次模型拟合曲线计算其相关的生物学参数。采用BD FACSCALIB检测不同剂量放射后HepG2细胞周期分布变化,及不同浓度4-ANI对放射后不同时间的HepG2细胞周期的影响。结果：体外增殖实验显示总体上实验浓度范围内的4-ANI对HepG2细胞无明显药物毒性,药物作用24h后,细胞未出现明显抑制,且与对照组相比,20uM组和30uM组反而有促进细胞增殖的作用；药物作用48h后,存活曲线整体呈下降趋势,但均不低于80%；且不同浓度组在12、24、48h三个时间点的存活率均数均有统计学差异,均有P<0.001。细胞克隆形成实验证实,4-ANI对HepG2细胞有明显的放射增敏作用,并且放射增敏作用与4-ANI浓度呈正相关性。10μM、20μM4-ANI处理组的细胞放射增敏比SERD37分别为1.13和1.30；SERD10分别为1.42和1.88。BD FCM检测结果显示放射可显著引起HepG2细胞的G2/M期阻滞,且阻滞程度与放射剂量呈正相关性趋势；4-ANI可以降低放射后引起的HepG2细胞的G2期阻滞,且4-ANI消除G2期阻滞的能力与浓度呈正相关性；同时FCM检测发现单纯药物组的HepG2细胞的G2期和S期比例有所升高；4-ANI对放射后HepG2细胞周期的影响并无时间连续相关性,仅在前24h表现出明显的去除G2期阻滞作用。以上结果经单因素方差分析采用Holm-Sidak method检验进行组间差异比较,均有统计学意义,P<0.05。结论：4-ANI单纯用药并未对HepG2细胞株产生明显毒性作用,而体外实验证实了4-ANI对HepG2细胞株有放射增敏作用,且增敏效果与4-ANI浓度呈正相关,FCM检测发现其增敏机制可能与消除放射引起的HepG2细胞G2期阻滞相关。这些研究结果表明PARP抑制剂4-ANI具有作为肝癌放射增敏药物的前景,并为4-ANI的深入研究提供了实验基础和理论依据。