【摘 要】
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目的:研究资木瓜总苷通过抑制肥大细胞活化,减少炎性因子产生,从而减轻对背根神经节神经细胞的活化作用,达到对类风湿关节炎(RA)关节镇痛的作用。方法:(1)小鼠骨髓来源肥大细胞(m BMMC)的培养及鉴定:分离提取C57BL/6小鼠骨髓来源的细胞,诱导分化培养4周后,进行TB染色和电镜观察,鉴定为m BMMC。(2)小鼠背根神经节神经细胞(DRGn)的培养及鉴定:分离提取C57BL/6小鼠的脊髓背根
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目的:研究资木瓜总苷通过抑制肥大细胞活化,减少炎性因子产生,从而减轻对背根神经节神经细胞的活化作用,达到对类风湿关节炎(RA)关节镇痛的作用。方法:(1)小鼠骨髓来源肥大细胞(m BMMC)的培养及鉴定:分离提取C57BL/6小鼠骨髓来源的细胞,诱导分化培养4周后,进行TB染色和电镜观察,鉴定为m BMMC。(2)小鼠背根神经节神经细胞(DRGn)的培养及鉴定:分离提取C57BL/6小鼠的脊髓背根神经节,酶解消化成单细胞后培养1周,进行免疫细胞化学和免疫荧光鉴定为DRGn。(3)CCK-8和MTT法检测不同浓度资木瓜总苷对m BMMC、RBL-2H3细胞和DRGn的毒性作用。(4)β-氨基己糖苷酶(β-Hexosaminidase)法检测m BMMC和RBL-2H3细胞活化脱颗粒情况。(5)建立共培养体系:组胺标准品与DRGn共培养,m BMMC与DRGn共培养,分别加入H1受体拮抗剂和TRPA1拮抗剂。(6)ELISA检测肥大细胞培养液中组胺(Histamine)含量、共培养体系中P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)含量。(7)Western blot检测DRGn的PLC-γ1蛋白和TRPA1蛋白的表达。结果:(1)经过鉴定,所提取培养的原代m BMMC和DRGn纯度均达到90%以上。(2)细胞毒性检测,资木瓜总苷浓度在0.01-0.32mg/ml之间时对m BMMC、RBL-2H3细胞和DRGn几乎无毒性。(3)资木瓜总苷可显著降低经化合物C48/80刺激m BMMC和RBL-2H3细胞释放的β-Hexosaminidase的释放率(P<0.01)。(4)资木瓜总苷可显著抑制m BMMC和RBL-2H3细胞释放Histamine的含量(P<0.01)。(5)在组胺标准品与DRGn共培养中,随着Histamine浓度的增高,DRGn释放的神经肽SP也随之增高,而加入H1受体拮抗剂后,SP相应地减少(P<0.05)。(6)在m BMMC与DRGn共培养体系中,分别加入资木瓜总苷、H1受体拮抗剂和TRPA1拮抗剂处理12h后,SP和CGRP的含量相应地减少,PLC-γ1和TRPA1蛋白表达量也减少(P<0.05)。结论:(1)资木瓜总苷浓度在0.01-0.32mg/ml之间对m BMMC的存活无影响,且随着药物浓度增高抑制肥大细胞活化脱颗粒。(2)Histamine能通过HR1呈浓度依赖性地引起DRGn释放SP。(3)资木瓜总苷可能是通过抑制MC-Histamine-HR1-TRPA1-DRG途径发挥类风湿关节炎镇痛作用。
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