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目的:本实验的目的是旨在通过体外细胞实验,观察新生霉素是否抑制了前列腺癌PC-3细胞的增殖,并在分子水平和形态学上证实新生霉素是否通过自噬抑制了前列腺癌PC-3细胞的增殖。为新生霉素应用于去势抵抗性前列腺癌的临床治疗提供理论和实验依据。方法:设置对照组和不同浓度的新生霉素实验组,作用前列腺癌PC-3细胞24小时后,利用MTT法测定对照组和不同浓度实验组的增殖率,并计算出新生霉素的半抑制率。透射电镜观察对照组及实验组细胞内的自噬体。利用免疫荧光技术,在荧光显微镜下观察对照组和不同浓度实验组发生细胞自噬时的自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和自噬底物相关蛋白P62的不同。利用RT-PCR在m RNA水平上检测对照组和不同浓度实验组的自噬相关基因LC3-Ⅱ、Beclin1的表达。利用Western-blot法在蛋白水平上检测对照组和不同浓度实验组的自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1及底物相关蛋白P62的表达。结果:1.MTT结果示新生霉素能有效抑制PC-3细胞的增殖(F=569.26,P=0.000),且随着浓度的增加,其抑制率也提高,根据公式计算出其IC50=1.52。2.透射电镜观察可见实验组PC-3细胞质内自噬体和自噬溶酶体数量明显较对照组多。3.荧光显微镜下,能清楚呈现绿色荧光FITC标记的自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ存在于细胞中的自噬体上,绿色荧光呈散点状分布在自噬体膜表面,随着实验组新生霉素浓度的增加,荧光强度增加。而绿色荧光FITC标记的自噬底物相关蛋白P62在荧光显微镜下的量随着药物浓度的增加而下降。4.RT-PCR在m RNA水平上检测到随着药物浓度的增加自噬相关基因LC3-Ⅱ、Beclin1的表达量升高。5.Western-blot法检测到随着药物浓度的提高自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1表达量上升,而自噬底物相关蛋白P62的表达量降低。结论:1.在体外细胞实验中,前列腺癌PC-3细胞的增殖能够被新生霉素所抑制,在我们实验浓度内随着浓度的增加其抑制率持续上升。2.通过透射电子显微镜和荧光显微镜,我们能够从形态学上直接或间接地观察到新生霉素使前列腺癌PC-3细胞自噬活性增强。3.在体外细胞培养的条件下,随着浓度的增加,新生霉素能够使自噬相关的Beclin1、LC3-Ⅱ分子在m RNA和蛋白水平上表达升高,能够使自噬底物降解相关蛋白p62表达减少。4.在体外细胞培养实验中,新生霉素能够抑制前列癌PC-3细胞的增殖,其机制可能是新生霉素触发了癌细胞的自噬,自噬导致癌细胞增殖受到抑制。