【摘 要】
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目的:使用免疫组化技术检测CCL18在膀胱癌组织及正常组织中表达的差异性,使用免疫印迹试验技术检测不同浓度CCL18作用及抑制CCR8受体时的EMT相关因子表达的差异性,使用shRNA干扰技术靶向沉默CCL18受体CCR8在膀胱癌细胞株中的表达,观察膀胱癌细胞株生物学行为改变,并探讨CCL18及CCR8受体通过调节EMT在膀胱癌转移侵袭过程中的具体分子机制。方法:1.收集膀胱癌组织及肿瘤组织旁非肿
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目的:使用免疫组化技术检测CCL18在膀胱癌组织及正常组织中表达的差异性,使用免疫印迹试验技术检测不同浓度CCL18作用及抑制CCR8受体时的EMT相关因子表达的差异性,使用shRNA干扰技术靶向沉默CCL18受体CCR8在膀胱癌细胞株中的表达,观察膀胱癌细胞株生物学行为改变,并探讨CCL18及CCR8受体通过调节EMT在膀胱癌转移侵袭过程中的具体分子机制。方法:1.收集膀胱癌组织及肿瘤组织旁非肿瘤浸润膀胱组织标本,行CCL18的免疫组化分析,了解CCL18在不同组织中、不同等级膀胱癌中的表达差异性,以及其对肿瘤预后的影响。2.使用不同浓度CCL18作用于膀胱癌细胞(人膀胱癌5637细胞),加入CCR8受体抑制剂R243阻断CCR8与CCL18结合,通过western blot检测EMT相关因子E-cadherin、MMP-2、VEGF的表达水平比较其差异性。3.人膀胱癌5637细胞株转染CCR8 shRNA,为转染组;转染质酯体(Lipo2000)为阴性对照组;未处理组为空白组。通过荧光显微镜观察人膀胱癌5637细胞株的转染效率,qRT-PCR检测相关基因的表达水平;Western blot法检测相关蛋白的表达情况;Transwell小室法检测转染肿瘤细胞侵袭力变化情况。结果:1.CCL18 mRNA在膀胱癌组织中的表达水平对比在非癌组织中明显上调,在3级及4级膀胱癌组织中的表达水平要高于2级膀胱癌组织,更高的CCL18表达水平提示更高的肿瘤分期(P<0.05),Kaplan—meier分析表明,CCL18的表达水平与膀胱癌患者的预后呈相关性(log?rank test,P=0.0487)。2.人膀胱癌5637细胞中EMT相关因子E-cadherin随CCL18浓度增加其蛋白表达下调(P<0.05),而MMP-2、VEGF-C随CCL18浓度增加其蛋白表达上调(P<0.05)。3.CCL18通过CCR8受体影响膀胱癌的侵袭转移,沉默CCR8受体后E-cadherin表达上调(P<0.05),而MMP-2、VEGF-C表达下调(P<0.05),人膀胱癌5637细胞侵袭力较大程度下降(P<0.05)。结论:1、CCL18能促进膀胱癌细胞的迁移和侵袭。2、CCL18在膀胱癌组织中的表达水平与膀胱癌患者的分级、分期及预后呈相关性,越高的CCL18表达水平提示膀胱癌患者更差的疾病预后。3、CCL18可能通过与G蛋白偶联受体CCR8结合促进肿瘤的转移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)。
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