【摘 要】
：
研究背景和目的高毒力肺炎克雷伯菌（Hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKp）是临床上臭名昭著的病原性细菌,可以引起严重的原发性和转移性脓肿。高毒力耐药肺炎克雷伯菌在全球范围内的传播已有报道,对临床抗感染治疗带来巨大挑战。然而,导致兼具高毒力和耐药表型肺炎克雷伯菌分离株在世界范围内流行的具体机制尚不十分清楚。革兰氏阴性菌分泌的外膜囊泡（Outer membra
【基金项目】
：
国家自然科学基金（82072334）
论文部分内容阅读
研究背景和目的高毒力肺炎克雷伯菌（Hypervirulent Klebsiella pneumoniae,hvKp）是临床上臭名昭著的病原性细菌,可以引起严重的原发性和转移性脓肿。高毒力耐药肺炎克雷伯菌在全球范围内的传播已有报道,对临床抗感染治疗带来巨大挑战。然而,导致兼具高毒力和耐药表型肺炎克雷伯菌分离株在世界范围内流行的具体机制尚不十分清楚。革兰氏阴性菌分泌的外膜囊泡（Outer membrane vesicles,OMVs）是种内和种间传递效应分子的重要载体,也是一种独特的水平基因转移方式。本研究旨在探索高毒力肺炎克雷伯菌外膜囊泡（hvKp-OMVs）是否可以作为载体在菌-菌及菌-宿主细胞间转移毒力因子,阐明高毒力耐药肺炎克雷伯菌产生的新机制,为hvKp-OMVs在高毒力肺炎克雷伯菌诊断治疗中的应用奠定基础。研究内容与方法1.hvKp-OMVs分离纯化及鉴定表征对hvKp分泌的OMVs进行分离纯化,然后通过透射电镜（Transmission electron microscopy,TEM）、纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle tracking analysis,NTA）等技术对OMVs进行鉴定与表征。2.hvKp-OMVs关键毒力因子的提取与鉴定对hvKp-OMVs基因组DNA、质粒及蛋白进行提取,检测毒力基因,筛选相关功能蛋白。3.体外水平探索hvKp-OMVs介导毒力基因在菌株间传递将hvKp-OMVs与耐药肺炎克雷伯菌共转化48小时。鉴定转化株后,通过荚膜黏度实验、荚膜多糖含量测定实验、拉丝试验、毒力基因检测实验（Polymerase chain reaction,PCR）及药敏实验检测转化成功。4.分析转化株在小鼠感染模型中的毒力表达水平使用C57BL/6野生型（Wildtype,WT）小鼠作为动物模型,通过尾静脉注射菌株,血流感染小鼠,测定转化菌株的毒力水平。5.体外水平分析hvKp-OMVs诱导的免疫应答特性分析hvKp-OMVs作用于宿主细胞（RAW264.7细胞）:（1）细胞活性氧（Reactive oxygen species,ROS）及一氧化氮（Nitric oxide,NO）分泌量;（2）interleukin（IL）-6、interleukin（IL）-8 及 tumour necrosis factor（TNF）-α 等细胞因子的表达水平;（3）细胞凋亡。6.体内水平分析hvKp-OMVs诱导的免疫应答特性使用C57BL/6野生型（Wild type,WT）小鼠作为动物模型,尾静脉注射hvKp-OMVs,对小鼠靶脏器切片进行苏木精—伊红染色（Hematoxylin-eosin,HE）染色观察炎性细胞浸润情况。研究结果1.高毒力肺炎克雷伯菌可以分泌外膜囊泡（hvKp-OMVs）,经过TEM及NTA表征其具有外膜囊泡的典型结构和粒径。2.hvKp-OMVs含有与母体菌株一致的特征性毒力基因prmpA、iroB。3.hvKp-OMVs蛋白表达谱显示,hvKp-OMVs含有丰富的功能蛋白。4.hvKp-OMVs传递毒力调控基因到耐药肺炎克雷伯菌,导致耐药肺炎克雷伯菌毒力表达增强。5.hvKp-OMVs传递功能蛋白到宿主细胞（RAW264.7细胞）,诱导炎性反应及细胞凋亡。研究结论高毒力肺炎克雷伯菌可以分泌外膜囊泡。外膜囊泡含有毒力调控基因和功能丰富的蛋白。外膜囊泡可以携带毒力基因转移至耐药肺炎克雷伯菌,导致耐药肺炎克雷伯菌毒力表达增强,阐述了高毒力耐药肺炎克雷伯菌产生的新机制。外膜囊泡可以携载功能蛋白与巨噬细胞RAW264.7相互作用,诱发炎性反应及细胞凋亡。
其他文献
纵观现阶段的桥梁工程建设状况可知，大跨度预应力混凝土支架现浇连续箱梁取得广泛的应用，但涉及到的施工环节和作业要点较多，需要完成地基处理、支架预压、混凝土浇筑等各环节的各项细分工作，对施工技术水平提出较高的要求。鉴于此，以某桥梁工程为例，着重围绕相关技术展开探讨，论述其作业思路，阐述具体的作业方法，以期起到抛砖引玉的作用。
苏州美食作为苏州地域文化的重要组成部分，其讲究“不时不食”。春饼、夏糕、秋酥、冬糖等各色糕点美食，不仅具有鲜明的时令特点，还具有食疗养生功效。但面对部分五谷不分、节气不明的新都市人群，“不时不食”的苏式美食也渐行渐远。基于此，本文在分析二十四节气和苏式点心内涵的基础上，探索二十四节气苏式点心的创新实践研究，旨在将苏州的节气饮食思想融入点心中，促进节气民俗资源的重组和饮食传统的再创造，为人们创新研发
校园足球工作是一项系统、长期的基础工程，是学校高质量落实教育立德树人根本任务的具体抓手，是促进学生健康成长、全面发展的重要举措，是教育强国、体育强国建设的重要组成部分，关系国家发展和民族复兴。本文结合国家有关校园足球发展的政策要求，从师资培训和硬件建设、课堂教学和专业训练、校园文化和主题活动等方面全面概述了河北衡水中学校园足球工作开展情况。
年龄称谓是中国古代对人的年龄的非实际数字表达的特定称谓，其命名过程深深打上了中国古代社会、历史、文化的烙印。这些年龄称谓不仅具有知识性，而且反映了中国古人的生命认知，折射着汉民族古老的社会生活状况和文化观念。思维维度表现出直觉体悟、具象托思的传统思维方式；礼仪维度彰显了长幼有序、男女有别的礼仪规范；价值维度体现了引经据典、以古为好的价值取向；交际维度倾向于贵曲忌直、委婉含蓄的交际策略。对古代年龄称
针对传统基于视觉的人机交互易受复杂环境影响导致识别率不高等问题，提出了一种基于深度图像和骨骼图像融合的人体姿态识别算法.首先获取骨骼信息，对人体骨骼建模及关节坐标点追踪，采用阈值法对肢体距离和夹角特征进行提取，将人体关节点通过坐标映射至深度图像，提高了关节点定位精度.遵循计算机视觉原理获取深度信息，对人体姿态图像进行采集、形态学处理、特征提取等操作，结合人体姿态动态函数方程，可以正确识别唤醒、举手
该文通过文献资料、问卷调查、访谈等方法对广西南宁市小学校园足球的开展现状进行了调查研究。结果发现，小学校园足球的开展得到了各级政府和学校的支持，但还存在缺少专业足球教师、足球训练教学方法单一、足球场地设施不足等问题，建议壮大小学校园足球师资队伍，鼓励体育教师提高足球训练教学水平，完善足球教学体系，通过政府和社会力量合作增加足球场地设施，从而为足球后备人才的培养以及其他地区校园足球的开展提供一定的借
校园足球活动的推广不仅可以充分调动学生参与体育锻炼的积极性,同时也能提升学校专业型人才的培养力度。该文以校园足球为研究对象,对嘉峪关市的25所小、初、高学校展开实地调研,通过问卷调查、文献查阅、调查分析等多种调研方法,得出相关的调研结果:足球作为体育运动的重要载体之一,对于提升学生参与体育运动的积极性,提高学生整体体育素养都起着重要作用,同时也为专业性足球人才队伍储备青年运动员奠定了扎实基础,足球
为破解教师老龄化问题，河南省洛阳市偃师区实验小学教育集团出台各种措施激发教师动力、提升教师能力。一是通过开展师德教育、制定个人规划等方式，唤醒教师成长动力；二是通过组织专业阅读、开展“青蓝工程”等方式，厚植教师内在实力；三是通过开展常态教研、“五课”展示等方式，夯实教师专业能力；四是通过开展多元评价、突出过程性评价和团队评价，激发教师发展活力。
目的 探讨参乌益肾方对慢性肾脏病3期患者肾功能及白介素4、白介素10的影响。方法 选取2019年1月～2021年12月泰州市第四人民医院门诊及住院的符合研究条件的慢性肾脏病3期患者85例。比较慢性肾脏病3期患者与健康人群血清IL-4、IL-10的水平。将观察对象随机分为治疗组42例和对照组43例。对照组予以西医常规治疗，治疗组在常规治疗基础上加用中药汤剂参乌益肾方治疗，疗程12周，观察治疗前后24