基于表面等离激元共振对C-反应蛋白及其动力学常数的检测

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表面等离激元共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)传感器有着无标记、高通量、无污染、不受背景影响、能够实时检测、样品无需纯化和高灵敏度等优点,广泛应用于生物医药检测、药物分析、食品安全和环境检测等领域。但传统的等SPR设备需要大体积昂贵的仪器比如光谱仪等,并需要专人操作,使用成本昂贵。本论文采用光栅型耦合式SPR传感系统,通过采用纳米压印的方法,大面积周期性地制造纳米杯阵列,激发表面等离激元极化子,在特定的共振波长下通过纳米孔产生―增强光透射‖现象从而实现SPR传感。本论文以首先对目标检测物C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、SPR传感器的概念及理论做了简单介绍,总结了CRP定量的各种方法。本论文以用SPR传感器检测CRP为目的,设计了如下三种不同的检测方式:1.设计了基于普通96孔板的无标记SPR生物传感器对CRP和CRP抗体的结合动力学进行动态测量。使用双抗夹心法能提高灵敏度并增强特异性。该传感器达到50ng/m L CRP的检测限(Limit of Detection,LOD)。并测得CRP与CRP抗体间的结合速率常数值3.11×10~6(±0.40×10~6)M-1s-1,解离速率常数值2.00×10-2(±0.26×10-2)s-1,解离平衡常数KD=6.44×10-9(±0.38×10-9)。2.设计了一种超灵敏SPR增强免疫测定方法。该方法仅使用CRP抗体和聚乙二醇6000(Polyethylene Glycol-6000,PEG-6000)就能实现对CRP的定量。该方法不需要任何表面修饰和大型昂贵的设备,这使得能够广泛地应用于医院和实验室。SPR增强免疫测定方法检测CRP达到了1ng/m L的LOD,比常用的免疫测定方法和血浆中的CRP含量低至少3个数量级。3.设计了一种超灵敏的SPR比色法生物传感器。该方法通过在普通白光光源下,显微镜连续拍取SPR图像,用Image J分析图像红色通道灰度值的变化定量CRP。SPR比色法能够达到5ng/m L CRP的LOD,并在人工唾液为溶液介质中,成功区分出了1ng/m L CRP。该方法可无创地检测CRP,给需要连续多次监测CRP的患者带来了福音。
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