【摘 要】
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在集约化畜牧业生产发展的同时,应用药物诊断、预防和治疗动物的疾病显得十分重要,用于促进动物生长、同步发情、提高生产量等非治疗用途的药物品种和数量不断地增加,由此而
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在集约化畜牧业生产发展的同时,应用药物诊断、预防和治疗动物的疾病显得十分重要,用于促进动物生长、同步发情、提高生产量等非治疗用途的药物品种和数量不断地增加,由此而伴随产生的动物组织和产品中的药物残留(drug residue)对公众健康和环境的潜在危害也日趋严重.氯霉素(CAP)是第一个人工合成的广谱抗生素,因其效价高,价格低廉,在我国畜牧业中得到广泛应用,成为畜禽疾病防治的重要药物.随着氯霉素的广泛应用和研究,发现其有毒、副作用,相随而来的是氯霉素在动物组织中的残留危害问题,在逐渐认识中,其残留检测受到广泛关注,快速检测氯霉素在动物体的残留成为畜牧生产实践中亟待解决的重要问题.氯霉素是小分子半抗原,缺乏免疫原性.将半抗原与合适的载体蛋白偶联后,半抗原可以成为全抗原并具有较好的免疫原性;本研究以牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)为载体,采用重氮化法,合成氯霉素(CAP)的两种免疫偶合物免疫原CAP-BSA和包被抗原CAP-HAS;通过紫外光谱定性证明偶合物偶联是否成功.用上述两种偶联物分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验,结果产生了特异性抗体.交叉试验表明:产生的特异性抗体与氯霉素反应明显,与其他类似物交叉反应不明显.用上述获得的抗体对兔肉中氯霉素残留进行了间接竞争ELISA模拟检测,确定了间接竞争ELISA检测兔肉中氯霉素残留方法,测定的基础是竞争性酶联免疫反应,游离氯霉素与氯霉素辣根过氧化物酶标记物在同一系统中竞争数量有限的氯霉素抗体结合位点,氯霉素酶标记物与氯霉素抗体结合的数量反比于游离氯霉素的数量,以OPD-H<,2>O<,2>为底物,测量490nm波长的吸光度值,按标准曲线计算样品中的氯霉素含量.本方法的测定低限为20ng/mg,特异性试验显示与5个类似物交叉反应率小于0.01%,此间接竞争ELISA法测定氯霉素的标准添加回收率大于80%,平均变异系数CV%(n=3)为6.56,与HPLC法分析结果基本吻合,方法的准确度和精密度符合残留分析的要求.以上试验的结果表明:此间接竞争ELISA法符合目前国际上氯霉素残留量检测的要求.
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