【摘 要】
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蚊虫是多种重要传染病的传播媒介,全球每年有上百万人因感染蚊媒病而死亡,因此大力加强蚊虫防治势在必行。苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,
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蚊虫是多种重要传染病的传播媒介,全球每年有上百万人因感染蚊媒病而死亡,因此大力加强蚊虫防治势在必行。苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)是一类常见生物农药,有一定的杀蚊活性,但就整体而言其成本高,杀蚊活性较低等缺点,制约了进一步的推广发展,故深入了解Bti对蚊虫的作用机制进而开发高效廉价的Bti制剂成为当下亟待解决的难题。基于此,本研究尝试从蛋白组层面探讨致倦库蚊(Culex pipiens quinquefasciatus)对Bti晶体毒素的应答机制。研究选取分离自武夷山自然保护区的对蚊虫具有较高毒效的Bti菌种-LLP29菌株,提取其晶体毒素蛋白并以葡聚糖G50凝胶层析对晶体毒素中的Cyt毒素进行了分离纯化,并且以致倦库蚊Ⅳ龄幼虫作为生测对象,测定两类毒素的致死中浓度。结果表明LLP29晶体毒素对致倦库蚊Ⅳ龄幼虫的致死中浓度LC50为0.24μg/mL,而Cyt毒素对对致倦库蚊Ⅳ龄幼虫则不具显著特异毒性。以致死中浓度的晶体毒素处理致倦库蚊,剖取中肠进行双向电泳分析,得到表达存在显著差异蛋白33个,其中表达上调蛋白点22个,下调点11个,在质谱分析及Mascot软件检索后,得到20个差异蛋白信息,所得蛋白主要涉及机体能量合成、脂质运输、细胞骨架维护、蛋白折叠装配、细胞解毒、细胞凋亡调控等过程,综合分析表明致倦库蚊对晶体毒素的应答,是一个综合复杂的过程,囊括了模式识别、受体互作、信号转导、基因表达调控等诸多生物过程。该结论的提出有助于为下一步寻找关键节点基因,并进行功能验证,揭示致倦库蚊抵御Bt毒素侵染的分子机制提供理论基础。
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