脐血来源的CIK细胞与树突状细胞共培养后抗肿瘤效应的实验研究

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目的:树突状细胞(dendritic cells,DCs)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC);细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是目前所知杀伤活性最高的肿瘤杀伤细胞,为了进一步发挥二者的巨大效应,寻找有效的体外扩增方案,我们从人脐血中定向诱导培养出树突状细胞(dendritic cells,DCs)和CIK细胞,在抗原刺激DCs的基础上,加入CIK细胞共培养,观察DCs是否能增强其同来源的CIK细胞的抗肿瘤效应,探索肿瘤抗原特异性免疫治疗的新方法。 方法:1.常规无菌采集新鲜脐带血,密度梯度离心法分离出脐血单个核细胞(cord blood mononuclear cells,CBMCs),加入rhIFN-γ、rhIL-1、rhIL-2、CD3单克隆抗体及IL-4、GM-CSF、TNF-α等细胞因子分别定向诱导培养成DC、CIK细胞,并从形态学、分子免疫学上鉴定这两种细胞。2.将培养到第七天的两种细胞混合,分成三组:(1)肿瘤冻融抗原刺激的CIK-A-DC组(试验组),(2)未加抗原刺激的DC-CIK组和(3)单纯培养的CIK组(对照组),继续共培养,并通过光镜电镜观察细胞的形态和增殖情况,应用流式细胞仪测定细胞表型变化,ELISA法测定三组细胞及DC细胞分泌的细胞因子水平的差异。3.观察树突状细胞和CIK细胞共培养后对肿瘤细胞的作用:通过电镜和光镜观察CIK细胞诱导肿瘤细胞凋亡情况;流式细胞仪定量比较三组效应细胞诱导肿瘤细胞的凋亡情况,利用MTT法检测三组效应细胞在体外对人肿瘤细胞株的杀伤活性。 结果:1.实验发现:脐血来源的单个核细胞中加入细胞因子后,可大量诱导出高活性的DC和CIK细胞,无论在细胞形态还是免疫表型上都与培养前有明显的变化,具有典
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