刺五加为五加科植物刺五加Acanthopaanaxsenticosus(Rupr.etMaxim.)Harms的干燥根以及根茎,是重要北方道地药材。现因刺五加药用价值被充分开发,引.起市场需求量剧增,导致野生刺五加因过度采挖而濒临灭绝,刺五加现已被列入《野生药材资源保护条例》国家二级保护植物。内生真菌(endophytic fungi)是指存活于健康植物组织内部,而宿主植物不表现出明显感染症状的一类真菌,其次生代谢产物十分丰富,可以产生与宿主植物相同、相似的具有药用价值的生物活性物质或活性物质前体。因此,开发利用内生菌成为现代研究的一个新的热点。本文以刺五加内生真菌CWJ2为研究对象,采用GC-MS法对刺五加内生真菌CWJ2发酵液中挥发性成分进行分析;同时采用各种提取分离及鉴定技术对其次生代谢产物进行分离、纯化,鉴定,并以DPPH法对其代谢产物进行初步抗氧化活性研究,并对刺五加内生真菌CWJ2进行了种属鉴定,主要结论如下:1.采用GC-MS分析刺五加内生真菌CWJ2发酵液乙酸乙酯萃取物中挥发性物质,结果共检出50种挥发性物质,其中:三氮杂环硼烷、4-羟基-3,5,5-三甲基-4-(3-氧代丁-1-烯-1-基)环己-2-烯-1-酮、邻苯二甲酸丁辛酯、2-乙基-1,4-二甲基苯在发酵液中含量相对较高。2.对刺五加内生真菌CWJ2菌株进行大量的液体发酵,应用液-液萃取法、硅胶柱色谱等手段,以聚酰胺薄层鉴别结果为依据,对CWJ2菌株的发酵液和菌丝体中的活性物质进行系统分离纯化,获得3个单体物质,分别为结晶1、结晶2和结晶3。3.应用高效液相色谱(HPLC)、氢核磁共振谱(1H-NMR)、碳核磁共振谱(13C-NMR)及HPLC-MS对结晶1,结晶2和结晶3进行结构鉴定,结果表明,结晶 1 为 pseurotinA。4.采用DPPH法对分离得到的3个单体化合物进行初步抗氧化研究,在12.5-200μg/mL的浓度范围内,3个样品对DPPH自由基的清除率随着浓度的升高显著增强。在浓度为200μg/mL时,3个样品的清除率分别达到47.4%、95.6%和94.8%。5.采用形态学和分子生物学18S rDNA序列分析相结合的方法对刺五加内生真菌CWJ2菌株进行种属鉴定,结果显示,CWJ2菌株为变色曲霉菌(Aspergillus versicolor)。本文首次对刺五加内生真菌CWJ2菌株的活性代谢物进行了分离纯化,得到重要天然产物——pseurotinA,说明刺五加内生真菌CWJ2为pseurotinA产生菌。