【摘 要】
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本研究在于探寻一种利用单个核细胞为初始接种细胞,获得高纯度和高活性自然杀伤(NK)细胞的新方法,为NK细胞免疫治疗奠定实验基础。收集3份健康足月孕妇的脐带血,密度梯度分离
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本研究在于探寻一种利用单个核细胞为初始接种细胞,获得高纯度和高活性自然杀伤(NK)细胞的新方法,为NK细胞免疫治疗奠定实验基础。收集3份健康足月孕妇的脐带血,密度梯度分离单个核细胞(MNCs),每份细胞样本分别接种于经抗人CD16 m Ab,CD3 mAb和CD16 mAb+CD3 mAb铺板的培养瓶中。使用含自体血浆、重组人IL-2,IL-15和IL-21的无血清培养基,在相同条件下培养扩增14 d。计算扩增倍数,并利用流式细胞术测定CD56+CD3-细胞的比例。以白血病细胞系K562细胞为靶细胞,利用MTT实验测定所培养NK细胞在不同效靶比条件下的杀伤率。结果表明,培养14 d后,CD16mAb,CD3 m Ab和CD16 mAb+CD3 mAb组细胞总数分别扩增45.71±5.54、87.41±19.77和51.84±4.88倍,CD3 mAb组显著高于其它2组(P<0.05)。培养前CD56+CD3-细胞比例为0.1663±0.0201,经培养扩增14 d后CD16 mAb,CD3 mAb和CD16 mAb+CD3 mAb组CD56+CD3-细胞比例分别为0.8167±0.0500、0.8077±0.0589和0.8077±0.0273,3组无显著差别。培养14 d后,MTT杀伤实验显示,效靶比为1:1、5:1和10:1时,3组杀伤效率均无显著差别(P>0.05)。结果提示,使用抗CD3 mAb及IL-2,IL-15和IL-21培养单个核细胞,可获得高纯度和高杀伤活性的NK细胞。本研究为NK细胞的体外纯化扩增提供了一个简单有效的方法。
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