【摘 要】
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目的:探讨胶质瘤组织细胞中GDNF基因在转录过程中发生的选择性剪接异常变化,并揭露这种变化对胶质瘤迁移能力可能存在的影响。方法:针对高度同源的GDNF剪接变异体cDNA的高效
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目的:探讨胶质瘤组织细胞中GDNF基因在转录过程中发生的选择性剪接异常变化,并揭露这种变化对胶质瘤迁移能力可能存在的影响。方法:针对高度同源的GDNF剪接变异体cDNA的高效引物,应用Real-time PCR检测胶质瘤组织细胞中GDNF选择性剪接体α-pro-GDNF和β-pro-GDNF的mRNA表达水平;利用western blot检测细胞中α-pro-GDNF和β-pro-GDNF蛋白的表达情况,同时选择免疫荧光染色的方法检测胶质瘤细胞中蛋白的表达分布及表达水平。构建过表达和干扰α-pro-GDNF蛋白的慢病毒质粒并转染胶质瘤细胞U251,使α-pro-GDNF蛋白的表达上调或下降,随后利用划痕实验检测转染后的U251胶质瘤细胞迁移能力的变化。结果:Real-time PCR和western blot结果均表明胶质瘤细胞中GDNF基因存在选择性剪接体,且随着胶质瘤WHO级别升高,α-pro-GDNF和β-pro-GDNF的mRNA和蛋白的表达水平均呈逐渐升高趋势,且α-pro-GDNF的mRNA和蛋白的升高趋势较β-pro-GDNF尤为明显,呈优势表达;免疫荧光染色表明α-pro-GDNF和β-pro-GDNF蛋白主要表达于细胞胞质中,荧光强度定量分析进一步提示胶质瘤细胞中蛋白表达量较正常细胞多;慢病毒转染成功后,过表达组α-pro-GDNF蛋白升高,干扰组α-pro-GDNF蛋白降低,划痕实验初步表明α-pro-GDNF蛋白表达的变化会影响胶质瘤细胞的迁移能力。结论:胶质瘤细胞中GDNF基因发生异常选择性剪接,其中α-pro-GDNF优先表达,并与胶质瘤迁移能力密切相关,为胶质瘤的治疗提供新的作用靶点。
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