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背景多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是导致女性不孕的常见生殖内分泌疾病,其卵泡发育呈混乱无序的状态,多个窦卵泡停滞在主导卵泡选择前,无优势卵泡形成,不能正常排卵。研究表明卵泡的发育与颗粒细胞的功能状态密切相关,自噬与凋亡的发生均可调节颗粒细胞增殖与死亡的平衡状态,因此研究颗粒细胞的自噬与凋亡对于探索PCOS的病理生理机制至关重要。PCOS患者脂质代谢紊乱发生率明显高于正常人,脂质代谢紊乱不仅导致心血管疾病发生风险增加,同样会威胁女性生育力。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)的产生作为脂质代谢的重要环节,与心血管疾病、糖尿病等多种代谢性疾病的发生发展密切相关。PCOS患者血清与卵泡液ox-LDL水平明显升高。研究发现ox-LDL通过影响颗粒细胞相应受体LOX-1、TLR4表达,诱导颗粒细胞发生修复性自噬或自噬性死亡。白藜芦醇(resveratrol,RES)作为常见的抗氧化剂,能够减少窦状卵泡,增加次级卵泡,减少颗粒细胞死亡,促进其增殖,降低氧化应激水平。此外,RES可降低雄激素水平,增加胰岛素敏感性,诸多研究证实RES对PCOS的治疗具有一定的临床价值。那么RES对颗粒细胞自噬与凋亡有无影响呢,目前未见报道。本研究旨在探究RES对ox-LDL诱导的颗粒细胞自噬与凋亡的调控作用,为深入研究PCOS患者排卵功能障碍的病理生理机制奠定基础。目的探索白藜芦醇对ox-LDL诱导颗粒细胞自噬的调控作用及分子机制,研究白藜芦醇对ox-LDL诱导颗粒细胞凋亡的调控作用。材料和方法于郑大一附院生殖中心筛选符合纳入条件的患者28例,收集卵泡液,将提取的颗粒细胞在体外进行原代培养48h。将颗粒细胞分为4组,实验组1加入150μg/ml ox-LDL,实验组2加入30μM RES,实验组3加入100μg/ml ox-LDL+30μM RES,对照组不予处理,添加后36h检测LOX-1,自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I及凋亡标志物cleaved caspase3表达,并对ROS、p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K、p-Ser2448-mTOR、mTOR进行检测。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测LOX-1、Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I、p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K、p-Ser2448-mTOR、mTOR表达,通过RT-qPCR检测LOX-1mRNA表达,通过ROS试剂盒检测颗粒细胞内ROS含量。探究RES对ox-LDL诱导颗粒细胞自噬与凋亡的调控作用研究。结果1.ox-LDL处理组自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I以及凋亡标志物cleaved caspase3表达均高于对照组(Beclin1:P<0.001,LC3-Ⅱ/LC3-I:P<0.001,cleaved caspase3:P<0.001),ox-LDL+RES处理组自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-I以及凋亡标志物cleaved caspase3表达均低于ox-LDL处理组(Beclin1:P<0.01,LC3-Ⅱ/LC3-I:P<0.001,cleaved caspase3:P<0.001)。2.ox-LDL处理组LOX-1mRNA表达均高于对照组(P<0.001),ox-LDL+RES处理组LOX-1mRNA均低于ox-LDL处理组(P<0.001)。ox-LDL处理组LOX-1表达均高于对照组(P<0.001),ox-LDL+RES处理组LOX-1均低于ox-LDL处理组(P<0.01)。3.ox-LDL处理组细胞内ROS含量均高于对照组(P<0.001),ox-LDL+RES处理组细胞内ROS含量均低于ox-LDL处理组(P<0.001);ox-LDL处理组AKT、PI3K、mTOR磷酸化水平均低于对照组(PI3K:P<0.001,AKT:P<0.001,mTOR:P<0.001),ox-LDL+RES处理组AKT、PI3K、mTOR磷酸化水平高于ox-LDL处理组(PI3K:P<0.001,AKT:P<0.05,mTOR:P<0.01)。结论1.RES可抑制ox-LDL诱导的颗粒细胞自噬与凋亡。2.RES通过下调LOX-1表达,减少细胞内ROS含量,干扰PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而抑制ox-LDL所诱导的颗粒细胞自噬的发生。