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鼻咽癌是华南地区常见的恶性肿瘤之一。鼻咽癌的发生、发展和遗传因素、EBV感染、饮食因素等众多因素相关,但是具体机制尚未完全清楚。
脾酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase,SYK)在较长时间里被认为是造血细胞特有的信号分子,后来发现SYK在多种非造血细胞中也有表达,并且在乳腺癌、肝癌、黑色素瘤、胃癌和头颈部鳞状细胞癌等肿瘤组织中表达异常,这些研究表明,SYK在不同肿瘤的发生、发展中可能起着不同的作用;同时又有研究证明,SYK启动子甲基化可导致该基因失表达,SYK在EBV编码的LMP2A(Latent membrane protein2A)诱导的细胞迁移作用中起重要作用。但是SYK在鼻咽癌组织中的表达情况却还不清楚。
本文检测了鼻咽癌组织中SYK的表达情况,分析了SYK表达水平和患者临床病理特征以及预后的关系,研究了SYK启动子甲基化情况与其表达的关系,并且探讨了SYK与LMP2A之间的相互作用。
方法:
应用免疫组织化学方法,研究鼻咽癌组织中SYK蛋白表达水平和患者临床病理特征以及预后的关系;应用甲基化特异性聚合酶链反应检测鼻咽癌组织和鼻咽粘膜组织中SYK启动子甲基化状态,并分析启动子甲基化状态与SYK蛋白表达的关系;应用荧光原位杂交技术检测SYK和LMP2A基因的mRNA水平;免疫荧光检测SYK和LMP2A蛋白的表达以及共定位情况;应用SPSS12.0分析软件分析各个数据。
结果:
组织芯片免疫组织化学染色结果显示:鼻咽癌组织中有85.52%(124/145)的组织表达SYK蛋白,同时39.31%(57/145)的组织高表达SYK;SYK在鼻咽癌组织中高表达与鼻咽癌患者的TNM分期、T分期及复发呈正相关(P<0.05);与患者年龄、性别、转移无关P>0.05)。
早期鼻咽癌患者SYK高表达表达组和低表达组患者的5年生存率分别34.29%和79.71%,两组生存率有显著差异(P<0.05);晚期鼻咽癌患者SYK高表达表达组和低表达组患者的5年生存率分别36.38%和57.79%,两组生存率有显著差异(P<0.05);所有患者中,SYK高表达表达组和低表达组患者的5年生存率分别35.79%和63.50%,两组生存率有显著差异(P<0.05)。
单因素Cox回归分析显示SYK的蛋白高表达(P=0.005,HR=1.398)、患者性别(P=0.007,HR=0.409)、临床分期(P=0.009,HR=1.572)、T分期(P=0.097,HR=1.523)、复发(P=0.024,HR=1.728)、转移(P=0.012,HR=2.124)与患者预后不良相关;多因素分析显示SYK高表达(P=0.004,HR=1.432)、患者的性别(P=0.016,HR=0.444)、年龄(P=0.028,HR=1.027)、转移(P=0.001,HR=3.028)分别是不良预后的独立因素。
36例鼻咽癌组织中有77.78%(28/36)的检测到了SYK启动子的去甲基化,同时80.56%(29/36)检测到了SYK蛋白表达,Pearson相关分析表明SYK蛋白表达同SYK启动子的去甲基化呈显著正相关(R=0.581,P<0.001);14例鼻咽粘膜组织中有92.86%(13/14)的检测到了SYK启动子的甲基化,同时92.86%(13/14)的组织未检测到SYK蛋白表达;所有的50例组织中58.00%(29/50)的检查到了SYK启动子的去甲基化,同时60.00%(30/50)的组织表达SYK蛋白,Pearson相关分析表明SYK蛋白表达同SYK启动子的去甲基化呈显著正相关(R=0.711,P<0.001)。
荧光原位杂交显示10例新鲜鼻咽癌组织中SYK mRNA和LMP2A mRNA表达水平均高于癌周围组织以及5例鼻咽粘膜组织,且SYK mRNA和LMP2A mRNA的表达水平具有一致性;稳定转染LMP2A的SUNE1和CNE2细胞中SYK mRNA表达增强,同时SYK蛋白表达也有增强,并观察到了两个蛋白的共定位现象。
结论:
1.SYK在鼻咽癌组织中高表达并且与鼻咽癌患者的TNM分期、T分期及复发明显正相关,其高表达提示预后不良。
2.SYK基因启动子去甲基化是SYK蛋白在鼻咽癌组织中高表达的原因之一。
3.鼻咽癌组织中SYK高表达和EBV感染相关。