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第一部分脂多糖诱导小鼠急性肺损伤模型的建立及EGFR、磷酸化EGFR在肺组织中的表达目的:建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)模型,并检测肺组织中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)的表达。方法:选择6-8周,体重18-22克的C57BL/6雄性小鼠作为研究对象,实验组(n=6)使用气管内滴注法给予LPS(2mg/kg)诱导小鼠ALI模型,对照组(n=6)使用同等剂量的生理盐水气管内滴注,24h后收集肺组织和肺泡灌洗液(BALF),肺组织切片Hematoxylin-eosin(HE)染色评估急性肺损伤程度,石蜡切片免疫荧光染色评估EGFR、p-EGFR表达水平,Western Blot检测EGFR、p-EGFR蛋白质表达水平。结果:实验组小鼠HE染色可见LPS诱导小鼠组有明显的急性肺损伤表现,对照组未见明显损伤;免疫荧光染色可见LPS诱导的ALI组EGFR阳性的细胞数量未见明显变化,但p-EGFR阳性的细胞数量明显增加(p<0.05),而对照组p-EGFR与EGFR阳性细胞的数量未见明显差异(p>0.05);Western Blot结果显示实验组及对照组均可见EGFR表达,两组表达水平无明显差异,但LPS诱导的ALI组p-EGFR蛋白质表达水平明显增加(p<0.05)。结论:在LPS诱导的小鼠ALI模型中,肺组织损伤严重,并且p-EGFR蛋白表达水平明显增强。第二部分EGFR抑制剂Erlotinib在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤模型中的作用目的:检测EGFR抑制剂Erlotinib在LPS诱导的小鼠ALI模型中的影响。方法:选择6-8周,体重18-22克的C57BL/6雄性小鼠作为研究对象,随机分为6组,每组6只。空白对照组(Control)小鼠不予以任何处理;阳性对照组小鼠采用100mg/kg剂量的erlotinib灌胃(ER);实验组小鼠采用2mg/kg的LPS气管内滴注(LPS);药物处理组小鼠分为三组,依次为:10mg/kg erlotinib剂量灌胃、1小时后采用2mg/kg的LPS气管内滴注(ER10+LPS),25mg/kg erlotinib剂量灌胃、1小时后采用2mg/kg的LPS气管内滴注(ER25+LPS),100mg/kg erlotinib剂量灌胃、1小时后采用2mg/kg的LPS气管内滴注(ER100+LPS)。所有组小鼠均在LPS处理24小时后收集肺组织和肺泡灌洗液(BALF),肺组织切片HE染色评估急性肺损伤程度并进行肺组织损伤评分(Lung injury scoring system,LISS)评估,石蜡切片免疫荧光染色观察Gr-1阳性的中性粒细胞数量,显微镜下计数BALF中总细胞数量,BCA法评估BALF中总蛋白质水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中IL-1β表达水平。结果:肺组织损伤评分表明,与空白对照组及阳性对照组相比,LPS诱导的ALI中LISS评分明显升高(p<0.05),而使用erlotinib处理组后,LISS评分下降(p<0.05),并且呈现erlotinib剂量依耐性。Gr-1免疫荧光表明LPS诱导ALI组有明显中性粒细胞聚集(p<0.05),erlotinib处理后Gr-1阳性的细胞数量减少(p<0.05)。总细胞计数显示,LPS诱导ALI组BALF中细胞数量明显增多(p<0.05),erlotinib处理后细胞数量减少(p<0.05)。BCA法评估BALF总蛋白含量表明,erlotinib能够抑制LPS诱导的ALI中总蛋白的渗出水平(p<0.05)。ELISA检测BALF中IL-1β发现,使用erlotinib处理后IL-1β分泌水平均有下降(p<0.05)。结论:Erlotinib能够减缓LPS诱导的肺组织损伤程度,减少肺组织中中性粒细胞募集及肺组织蛋白和细胞的渗出,并能抑制炎症因子IL-1β的分泌。第三部分EGFR抑制剂Erlotinib减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用机制研究目的:探究Erlotinib在减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中的作用机制。方法:选择6-8周,体重18-22克的C57BL/6雄性小鼠作为研究对象,随机分为6组,每组6只。空白对照组(Control)小鼠不予以任何处理;阳性对照组小鼠采用100mg/kg剂量的erlotinib灌胃(ER);实验组小鼠采用2mg/kg的LPS气管内滴注(LPS);药物处理组小鼠分为三组,依次为:10mg/kg erlotinib剂量灌胃、1小时后采用2mg/kg的LPS气管内滴注(ER10+LPS),25mg/kg erlotinib剂量灌胃、1小时后采用2mg/kg的LPS气管内滴注(ER25+LPS),100mg/kg erlotinib剂量灌胃、1小时后采用2mg/kg的LPS气管内滴注(ER100+LPS)。所有组小鼠均在LPS处理24小时后收集肺组织,Western Blot检测肺组织中Toll-样受体4(TLR4)、p65、p-p65、IL-1β、TNF-α,及EGFR、p-EGFR、ERK、p-ERK、AKT、p-AKT蛋白质表达水平。结果:与空白对照组及阳性对照组相比,LPS诱导的ALI组中,p-p65、p-EGFR、p-ERK、p-AKT表达水平明显升高(p<0.05);在使用erlotinib灌胃处理后,p-p65、p-EGFR、p-ERK、p-AKT表达水平较LPS诱导的ALI组明显降低(p<0.05)。而TLR4、EGFR、ERK、AKT表达水平无统计学差异(p>0.05)。IL-1β、TNF-α在ALI模型中表达增加,但在erlotinib处理后,其表达水平降低(p<0.05)。结论:Erlotinib抑制EGFR信号通路激活进而减缓LPS诱导的ALI小鼠的肺组织损伤,并且TLR4信号通路参与这一过程。