新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的一类对世界养禽业造成严重危害的烈性传染病。为研究新城疫病毒毒力进化的分子机制，本研究主要利用反向遗传学技术对新城疫的几个主要结构蛋白进行了相关研究。　　本研究首先对实验室前期构建但拯救未成功的La Sota株感染性克隆进行了修饰和改造。经全基因组测序后发现前期构建的La Sota株的感染性克隆有多处碱基发生突变，因此，本研究针对发生碱基突变的片段重新设计引物以cDNA为模板重新扩增，同时重新进行了转录载体的改造和替换，构建了含有完整的La Sota株全基因组cDNA的感染性克隆。随后，将构建的完整的感染性克隆与相应的辅助质粒共转染BSR-T7/5细胞，进而将转染样品接种SPF鸡胚后，HA检测以及RT-PCR鉴定结果显示成功拯救出了具有感染性的La Sota株新城疫病毒。拯救的病毒其HA效价为3 log2～4 log2。　　本研究对新城疫病毒ClassⅠ强毒株9a5b的L蛋白C端(1990-2100 aa)进行原核表达，表达产物纯化后免疫小鼠，进而进行单克隆抗体的研制。通过ELISA和IFA等试验对制备的L单抗进行鉴定，结果显示成功制备4株新城疫病毒L蛋白的单克隆抗体，四株L单抗都具有ELISA和IFA效价，但均未检测到Western-blot效价，且4株单抗与NDV ClassⅠ毒株的反应强于与ClassⅡ毒株的反应，后期利用制备的L单抗对新城疫病毒L蛋白在细胞上进行了定位动态变化分析，结果显示L蛋白在病毒感染后第6h开始出现特异性的荧光，并均匀分布于细胞核周围，直至第24 h开始出现合胞体，L蛋白仍均匀散布于合胞体的胞浆中。　　本研究利用实验室已有的ClassⅠ强毒株9a5b株的反向遗传平台，对影响新城疫病毒毒力的几个结构蛋白F蛋白、HN蛋白和L蛋白进行了一系列的相关研究。首先是以NDV9a5b株基因组全长的cDNA的质粒TVT-BA为骨架，将La Sota株完整的L基因阅读框替换到TVT-BA骨架质粒中，构建以9a5b强毒株感染性克隆质粒为骨架含有La Sota株L基因的重组新城疫病毒，测序结果显示构建的感染性克隆存在多处碱基突变，这也可能是造成初步拯救失败的主要原因；二是以质粒TVT-BA为骨架，对其F蛋白裂解位点进行回复性突变，在反向遗传角度构建含有弱毒F蛋白裂解位点的重组病毒，以研究回复性突变的重组病毒是否在传代过程中有返强趋势，从而进一步研究F蛋白在新城疫病毒毒力进化中的作用；三是对其HN基因进行点突变，将9a5b毒株HN蛋白编码572 aa长度的质粒进行点突变，构建含有编码585 aa和616 aa长度的HN蛋白的重组新城疫病毒，经全基因组序列测定，成功构建了以上三个重组质粒，测序结果显示序列无突变。