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本研究以对肉鸡肺动脉高压综合症(Pulmonary Hypertension Syndrome,PHS)非易感品种海兰灰蛋鸡和对PHS易感品种白羽肉鸡为试验材料,对5-羟色胺转运体(5-hydroxytryptamine transporter,5-HTT)基因部分外显子和内含子及5’侧翼调控区序列进行检测和克隆测序,比较了海兰灰蛋鸡和白羽肉鸡5-HTT基因的多态性;用静脉注射纤维素微粒的方法复制肉鸡PHS模型,分析易感肉鸡与非易感肉鸡5-HTT基因的差异,探讨5-HTT基因多态性与PHS易感性之间的关系,为遗传选育抗PHS肉鸡提供一定的理论依据。
1.采用显著性片段长度多态性分析(PCR-RFLP,Restriction Fragment LengthPolymorphism)及单链构象多态性分析(PCR-SSCP,Single-Strand ConformationalPolymorphism)方法分析比较海兰灰蛋鸡和白羽肉鸡5-HTT基因序列,测序发现,在5’调控区共检测到10个SNPs(Single Nucleotide Polymorphism)及1个短片段(4bp)插入/缺失多态。基因型频率统计发现,这些突变位点在两个品种鸡中的基因型分布均有显著或极显著差异,故可将这10个SNPs及1个短片段(4bp)插入/缺失多态初步列为与肉鸡PHS发生有关的候选基因。在第1、2、3、6、7内含子区均检测到多态位点,至于该多态位点对PHS的发生是否产生影响,还有待进一步研究。在外显子1中发现4个SNPs和1个短片段(5bp)插入/缺失多态,分别为T40C、C53T、A84G、G171A、AGGAA(160-164)。T40C突变位点导致Phe变为Leu,C53T突变位点导致Ser变为Phe,A84G及G171A突变位点未发生氨基酸变化,为沉默突变。通过基因型频率统计结果发现,这些突变位点在两个品种鸡中的基因型分布差异显著,故可以将外显子1中A84G、G171A和AGGAA(160-164)这3个突变位点列为与肉鸡PHS发生有关的候选基因。在外显子6中发现1个SNP,为A77G。分析发现,该突变位点导致Asn变为Ser。通过基因型频率统计结果发现,该突变位点在两个品种鸡中的基因型分布差异显著,故可以将外显子6中A77G突变位点列为与肉鸡PHS发生有关的候选基因。
2.采用静脉注射纤维素微粒的办法诱发PHS,比较发病前后非易感组肉鸡和易感组肉鸡右心室重与全心室重比值(RV/TV)、心电图Ⅱ导联S波、R波和RS综合波波幅、红细胞压积(PCV)、血红蛋白(HB)含量、血清蛋白含量。试验结果显示,静脉注射纤维素微粒明显提高了肉鸡PHS的发病率。发病后腹水组肉鸡PCV、HB和RV/TV值升高,血清蛋白含量降低,心电图Ⅱ导联S波、R波和RS综合波波幅均升高,符合肉鸡PHS的特点。但发病前易感组肉鸡与非易感组肉鸡PCV、HB、血清蛋白含量和心电图Ⅱ导联S波、R波和RS综合波波幅均无显著性差异。
3.分析比较易感组和非易感组全部鸡的5-HTT基因序列,测序发现,在5’侧翼调控区共检测到11个SNPs及1个短片段(4bp)插入/缺失多态。基因型频率统计发现这些突变位点在两组鸡中均有分布,经过卡方独立性检验,由P8和P12这两个引物对扩增的片段中的突变位点在群体中的基因型分布并没有显著性的差异,故可初步排除其对肉鸡PHS发生起到了作用;由引物P9扩增的片段中的突变位点在群体中的基因型分布差异显著,故可将G-1618A、C-1589T和C-1548T这3个突变位点列为与肉鸡PHS发生有关的候选基因。在第1、3、6内含子区均检测到多态位点,至于这些多态位点对PHS的发生是否产生影响,还有待进一步研究。在外显子1中发现一个突变位点C53T,且该突变位点导致Ser变为Phe。通过基因型频率统计发现该突变位点在两组鸡中均有分布,且卡方独立性检验差异不显著。至于该位点是否在肉鸡PHS发生过程中起到了作用,可通过加大实验动物样本量进行进一步的研究。