【摘 要】
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转基因抗除草剂作物的大面积种植,可能会对环境产生不良的影响,本研究采用Intein介导的基因拆分和蛋白质重建技术获得一种新型转基因油菜植株,降低转基因植物由于花粉漂移所
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转基因抗除草剂作物的大面积种植,可能会对环境产生不良的影响,本研究采用Intein介导的基因拆分和蛋白质重建技术获得一种新型转基因油菜植株,降低转基因植物由于花粉漂移所引起的生态风险。主要研究结果如下:
1、成功获得转基因油菜
首先将来自草甘膦极端污染环境中的荧光假单胞菌G2-aroA gene(EPSPS)基因拆分,然后将拆分后的两个基因片段(所编码的多肽没有EPSPS蛋白质活性)分别与Intein的两个片段相连,获得两个融合基因片段EPSPSn-In和Ic-EPSPSc。通过农杆菌介导将两个融合基因片段和全长EPSPS基因分别转入甘蓝型油菜中,经PCR鉴定和Northern杂交获得转基因阳性植株。
2、油菜花粉活力和大小的测定
通过对转基因油菜和非转基因油菜花粉的活力(氯化三苯基四氮唑法)、花粉大小进行测定,经方差分析发现转基因油菜和非转基因油菜花粉活力差异不显著,其中花粉活力最高的为转EPSPS基因花粉,最低的为转EPSPSn-In油菜花粉。各种油菜花粉P/E(极轴/赤道轴)相比,存在显著差异。
3、EPSPS基因提高了油菜对草甘瞵胁迫的耐受性
将两种含融合基因片段的转基因油菜进行有性杂交,利用Intein介导重建EPSP蛋白活性得到抗草甘膦转基因植株。草甘膦抗性试验结果表明:转基因油菜F1代杂种中,部分杂交种能在喷施两次0.1％草甘膦浓度下生长一个月,相同条件下,非转基因植株枯萎死亡。
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