论文部分内容阅读
目的：探讨蛋白激酶C（protein kinase C，PKCs）对丙泊酚引起人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）内皮源性一氧化氮合成酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）激活和随后一氧化氮（nitric oxide,NO）产量的调节角色。方法：体外培养的HUVECs2-5代作为实验对象。首先用丙泊酚（1～100μmol/L）分别处理细胞1和24h，建立药物引起eNOS激活的量效关系曲线；用丙泊酚5μmol/L和50μmol/L分别处理细胞0、5min、1、6和24h，建立药物激活eNOS的时效曲线。其次用特异磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol3-kinase, PI3K)抑制剂LY294002（10μmol/L）和PKC广谱抑制剂bisindolylmaleimide I (Bis I,1μmol/L)预处理细胞30分钟，再用丙泊酚（5μmol/L和50μmol/L）处理细胞1和24小时，观察PI3K和PKC通路是否介导丙泊酚对eNOS的激活。最后用PKC各亚型特异抑制剂，siRNA或Adv-caPKC进一步确定PKC-а、PKC-δ、PKC-ε、PKC-θ和PKC-ξ对丙泊酚引起脐静脉血管内皮细胞eNOS激活的调节角色。结果：丙泊酚呈剂量、时间依赖性升高P-Ser1177-eNOS的表达。PI3K抑制剂LY294002，不影响异丙酚（5和50μmol/L）诱导eNOS磷酸化。PKC抑制剂Bis I能有效地阻止异丙酚诱导的eNOS的活化。对PKC亚型进一步的分析显示，用PKC（PKC-а、PKC-δ、PKC-ε、PKC-θ和PKC-ξ）特异亚型抑制剂、siRNA或Adv-caPKC选择性的抑制或过表达PKC各亚型发现，PKC-а和PKC-θ对丙泊酚（5和50μmol/L）诱导的急、慢性eNOS激活有显著增强效应；PKC-ε对丙泊酚（50μmol/L）诱导的慢性eNOS激活有显著增强效应；PKC-δ对丙泊酚（5和50μmol/L）诱导的急、慢性eNOS激活有显著抑制效应。结论：丙泊酚剂量、时间依赖性诱导eNOS的激活。这种激活独立与PI3K/Akt信号通路。PKC-α、PKC-ε和PKC-θ对丙泊酚引起脐静脉血管内皮细胞eNOS激活有显著的增强作用而PKC-δ对丙泊酚诱导eNOS的磷酸化有显著抑制效应。