论文部分内容阅读
目的:本研究应用眼针带针康复疗法治疗缺血性脑卒中恢复期运动功能障碍患者,通过观察患者运动功能、日常生活能力及血清学指标进行疗效评价。通过观察眼针带针康复疗法干预MCAO/R大鼠,观察各组大鼠神经功能、运动功能的变化及脑组织病理组织学形态,探讨其对MCAO/R大鼠的脑功能保护机制,并从血管新生机制探究眼针带针康复疗法对VEGFR2/PLCγ/PKC通路的影响。资料与方法:1.将122例于2020年12月-2021年12月在辽宁中医药大学附属医院康复中心脑病康复二科及中国医科大学附属盛京医院康复科住院,诊断为缺血性脑卒中恢复期运动功能障碍的患者,随机分为试验组与对照组,每组各61例。在试验过程中试验组脱落2例,对照组脱落1例,实际完成119例。两组在性别、年龄、病程上无显著差异,一般资料具有组间可比性。试验组予眼针带针康复疗法,对照组予常规康复治疗。两组均参照指南应用基础内科治疗并予必要体针治疗。两组康复治疗频率均为每日1次,每周治疗5次,疗程28天。应用简化Fugl-Meyer运动功能量表（FMA）、改良Barthel指数评定量表（MBI）、中风病中医证候评分、血清BDNF、VEGF水平作为评价指标。2.将大鼠随机分为空白（Blank）组、假手术（Sham）组、模型（Model）组、眼针带针康复（eye acupuncture combined rehabilitation,ER）组、眼针带针康复+阻断剂（ER+SU5416）组各20只。脑缺血再灌注模型建立采用改良线栓法。干预措施:Blank组:不做任何处理,正常饲养。Sham组:按照模型术式进行,控制线栓插入深度,不产生脑缺血灶。Model组:MCAO/R模型复制成功后,不做任何处理,正常饲养。ER组:MCAO/R模型复制成功后,于脑缺血再灌注后进行眼针带针康复治疗,每隔12h进行1次,每日2次,共计7天。ER+SU5416组:眼针带针康复治疗前30分钟腹腔注射VEGFR2阻断剂（SU5416）,其余同ER组。观察指标:（1）神经功能评价:采用Zea-Longa神经功能缺损评分,对各组大鼠进行评分,确保模型建立成功以及各组基线值具有可比性。采用m NSS神经功能缺损评分,对各组大鼠再灌注后及治疗7天进行神经功能评价。（2）采用TTC染色法观察各组大鼠治疗7天后的梗死面积,通过计算对比梗死面积观察各组大鼠脑组织恢复情况。（3）采用大鼠抓力测定仪对各组大鼠抓力分别从造模前、再灌注后及治疗7天后进行测定,观察各组大鼠运动功能恢复情况。（4）采用免疫荧光法对各组大鼠脑缺血半暗带HIF-1α蛋白表达量进行测定,采用实时荧光定量PCR反应检测脑缺血半暗带中VEGF、VEGFR2 m RNA相对表达量,采用蛋白质印迹测定各组大鼠脑缺血半暗带中VEGF、VEGFR2、PLCγ1、p-PLCγ1、PKC、p-PKC的蛋白相对表达,采用免疫组化法对CD34+的阳性细胞进行测定。结果:1.一般资料:两组患者的年龄、性别、病程无显著差异（P＞0.05）,组间具有可比性。2.两组患者治疗前上肢与下肢FMA运动功能评分差异未见统计学意义（P＞0.05）;与治疗前相比,对照组和试验组治疗后上肢、下肢运动功能评分均有显著性差异（P＜0.01）;与对照组相比,试验组治疗后上肢、下肢运动功能评分均有显著性差异（P＜0.01）。3.两组患者治疗前日常生活活动能力（ADL）评分差异未见统计学意义（P＞0.05）;与治疗前相比,对照组和试验组治疗后ADL评分均有显著性差异（P＜0.01）;与对照组相比,试验组治疗后ADL评分有显著性差异（P＜0.05）。4.两组患者治疗前中医证候评分差异未见统计学意义（P＞0.05）;与治疗前相比,对照组和试验组治疗后中医证候评分均有显著性差异（P＜0.01）;与对照组相比,试验组治疗后中医证候评分有显著性差异（P＜0.05）。5.对照组治疗后临床显效3人、有效44人,总有效率为81.03%;试验组治疗后临床显效6人、有效48人,总有效率为91.53%。6.对照组和试验组治疗后血清BDNF、VEGF水平均有显著性差异（P＜0.01）;与对照组相比,试验组治疗后血清BDNF水平有显著性差异（P＜0.01）,血清VEGF水平差异未见统计学意义（P＞0.05）。7.Sham组大鼠Zelongga评分无改变,Model组、ER组、ER+SU5416组大鼠造模后Zelongga评分均明显上升（P＜0.01）,提示大鼠脑缺血再灌注造模成功。8.ER组大鼠7d生存率高于Model组、ER+SU5416组且生存率较Model组、ER+SU5416组下降缓慢。9.干预7d后与Blank组相比,Sham组大鼠造模后TTC染色体积无明显变化（P＞0.05）;与Sham组相比,Model组大鼠造模后TTC染色体积百分比显著上升（P＜0.01）;与Model组相比,ER组大鼠TTC染色体积百分比显著下降（P＜0.01）;与ER组相比,ER+SU5416组TTC染色体积百分比显著上升（P＜0.01）。10.再灌注后,与Sham组相比,Model组、ER组、ER+SU5416组大鼠前肢抓握力量均显著降低（P＜0.01）,Model组、ER组、ER+SU5416组差异未见统计学意义（P＞0.05）。造模后7d,与Sham组相比,Model组、ER组、ER+SU5416组大鼠前肢抓握力量均显著降低（P＜0.01）;与Model组相比,ER组前肢抓握力量显著上升（P＜0.01）;与ER组相比,ER+SU5416组前肢抓握力量呈下降趋势,但差异未见统计学意义（P＞0.05）。11.与Blank组相比,Sham组大鼠造模后脑缺血再灌注后、7d的m NSS评分均无明显变化（P＞0.05）;与Sham组相比,Model组大鼠再灌注后、7d的m NSS评分显著上升（P＜0.01）;与Model组相比,ER组大鼠7d后m NSS评分呈下降趋势,但差异未见统计学意义（P＞0.05）。在组间比较中,与再灌注后相比,ER组造模7d后m NSS评分显著下降（P＜0.01）,ER+SU5416组造模7d后m NSS评分呈下降趋势,但差异未见统计学意义（P＞0.05）。12.免疫组化结果可见,Blank组与Sham组大鼠脑缺血半暗带组织CD34+细胞较少;与Blank组相比,Model组脑缺血半暗带组织CD34+细胞数量有所增加;与Model组相比,ER组脑缺血半暗带组织CD34+细胞数量有所增加;与ER组相比,ER+SU5416组脑缺血半暗带组织CD34+细胞数量有所下降。13.Blank组与Sham组大鼠脑缺血半暗带组织VEGF、VEGFR2 m RNA相对表达水平均未见明显变化（P＞0.05）;与Sham组相比,Model组VEGFR2 m RNA相对表达水平显著上升（P＜0.01）,ER组VEGF、VEGFR2 m RNA相对表达水平均显著上升（P＜0.01）;与Model组相比,ER组VEGF、VEGFR2 m RNA相对表达水平均有所上升（P＜0.05,P＜0.01）;与ER组相比,ER+SU5416组VEGF、VEGFR2 m RNA相对表达水平均有所下降（P＜0.05,P＜0.01）。14.免疫荧光结果可见,Blank组与Sham组大鼠脑缺血半暗带组织HIF-1α的蛋白表达较低;与Blank组相比,Model组脑缺血半暗带组织HIF-1α的蛋白表达有所增加;与Model组相比,ER组脑缺血半暗带组织HIF-1α的蛋白表达有所增加;与ER组相比,ER+SU5416组脑缺血半暗带组织HIF-1α的蛋白表达有所下降。15.Blank组与Sham组大鼠脑缺血半暗带组织VEGF、VEGFR2、p-PLCγ1、PLCγ1、p-PKC、PKC蛋白相对表达水平均未见明显变化（P＞0.05）;与Sham组相比,Model组VEGF、VEGFR2蛋白相对表达水平均有所上升（P＜0.05,P＜0.01）,ER组VEGF、VEGFR2、p-PLCγ1/PLCγ1、p-PKC/PKC蛋白相对表达水平均显著上升（P＜0.01）;与Model组相比,ER组VEGF、VEGFR2、p-PLCγ1/PLCγ1蛋白相对表达水平均有所上升（P＜0.05,P＜0.01）,p-PKC/PKC蛋白相对表达水平呈上升趋势,但差异未见统计学意义（P＞0.05）;与ER组相比,ER+SU5416组VEGF、VEGFR2、p-PLCγ1/PLCγ1、p-PKC/PKC蛋白相对表达水平均有所下降（P＜0.05）。结论:1.通过临床研究证实,眼针带针康复疗法可促进缺血性脑卒中恢复期患者运动功能的障碍恢复,运动功能明显增强,中医临床症状、体征有所改善,日常生活能力提高。2.眼针带针康复疗法能够提高缺血性脑卒中患者血清BDNF、VEGF因子水平,表明眼针带针康复疗法可能在神经保护及促进血管新生中发挥作用。3.动物实验表明,眼针带针康复疗法可改善MCAO/R大鼠脑梗死面积,促进运动及神经功能恢复。4.眼针带针康复疗法通过激活VEGFR2/PLCγ/PKC信号通路从而促进血管新生,可能是眼针带针康复疗法促进缺血性脑卒中运动功能恢复的机制之一。