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目的:构建人Graves病甲状腺组织反向消减文库,筛选在Graves病中表达的差异基因;采用EST策略,初步分析EST的生物学功能,为Graves病基因组研究奠定基础.方法:运用一步法分别提取正常甲状腺组织及Graves病甲状腺病组织RNA,分离mRNA,然后逆转录成cDNA,将差异表达的cDNA作为检测子(Tester),对照cDNA作为驱动子(Driver),Tester和Driver进行杂交,相同的序列被消减,得到的未消减cDNAs代表的基因在Tester mRNA中表达,而在Driver mRNA中不表达.该实验将来自甲状腺腺瘤旁正常甲状腺组织的cDNA作为检测子,而来自Graves病甲状腺组织的cDNA作为驱动子,应用抑制性消减杂交技术(Suppression SubtractiveHybridiz-ation)构建人Graves病差异表达的cDNA反向消减文库.文库构建后将其进行扩增,进行蓝白筛选,随机挑取噬菌斑,提取质粒,将其中的插入片段进行测序,并登陆GeneBank进行生物信息学分析.结论:1成功构建了人Graves病甲状腺组织反向消减文库;2通过测序获得15个EST,代表4个已知基因,4个未知基因.其中2个EST与Cytochrome-b(细胞色素B)有一定的同源性,1个EST与Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1(异质核内核糖核蛋白A1)有一定的同源性,1个EST与V-fosFBJ murine osteosarcoma viral oncogene(鼠骨肉瘤病毒癌基因)有一定的同源性,1个EST与Zincfinger,BED domain containing 2(锌指基因)有一定的同源性,并初步分析了它们的功能;4个新基因片段登录Genebank,基因接受号为:CF569047、CF569048、CF569049、CF752100,这对进一步筛选,克隆Graves病差异表达的未知新基因和已知基因的新生物学功能研究具有重要意义.