背景及目的：脓毒症（sepsis）是严重感染、休克、烧伤等重症感染患者常见的并发症，可进一步发展成为多器官功能衰竭（multiple organ dysfunction syndrome，MODS），其发病迅速，病死率高。目前对于脓毒症的发病机制已逐渐有一致的看法，即全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）是形成脓毒症及多器官功能衰竭重要的病理学基础和形成的根本原因。MAPK信号转导通路存在于大多数细胞内,其中的p38（38kDa protein）丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)为细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白酶激酶，是介导细胞反应的重要信号系统，在炎症反应中起着十分重要的作用。在SIRS中产生的炎症因子众多，其中TNF-是最重要的炎症介质。相关报告中指出原花青素在内毒素刺激的单核-巨噬细胞中作为抗炎剂，其抗炎机制可能是通过对核转录因子转化的抑制作用来调节激活的单核-巨噬细胞的免疫应答,从而发挥抗炎的效应。本文通过LPS诱导THP-1细胞构造脓毒症体外模型，揭示原花青素对脓毒症细胞模型具有显著的保护作用，且在较大的药物浓度范围内无毒副作用。证实原花青素能够抑制TNF-等炎性因子的释放，探讨原花青素抑制TNF-的释放与p38MAPK通路的关系。方法：将人THP-1细胞进行体外培养（37℃、5％CO2的孵箱内），至对数生长期后，加入LPS1ug/ml制造脓毒症模型。首先利用细胞药物毒性实验（CCK-8），一是研究原花青素对THP-1细胞增殖活性是否有影响。二是选取药物作用的三个时间点，即6h,12h,24h，在各时间点下依据不同的药物浓度进行分组,研究原花青素对LPS诱导的THP-1细胞生存率的影响，从而选择药物作用较适宜的时间及药物浓度；其次利用ELISA检测不同药物浓度下TNF-的相对蛋白浓度，选择原花青素最佳的药物作用浓度。最后，利用Western blotting测p38及NF-κB蛋白的表达量，揭示原花青素抑制TNF-的释放与p38MAPK通路的关系。结果：1、利用CKK-8试剂盒对细胞增殖的活性进行测定，酶联免疫检测仪测450nm处测定吸光度值，用各组细胞活力值（%）表示。与对照组相比，不同的原花青素浓度下变化不明显，对THP-1细胞增殖活力的影响没有统计学意义（P＞0.05）。2、（1）利用CCK-8试剂盒对各组细胞生存率进行测定，用细胞活力值（%）表示。于6h,12h,24h这三个不同的药物作用时间点下，LPS+不同浓度药物组的细胞活力均低于对照组，有统计学意义（P＜0.05）。（2）不同的药物作用时间点下，随着原花青素浓度的不断增加，各组细胞生存率均呈现出先降低后逐渐上升的趋势，当原花青素的药物浓度于100ug/ml时细胞生存率再次下降。故为节约资源及简化操作，本实验将采12h组50ug/ml和100ug/ml两个药物浓度进行下一步研究。3、（1）ELISA法检测不同药物浓度组细胞上清液中TNF-的相对蛋白浓度，与对照组相比，实验组THP-1细胞TNF-的相对蛋白浓度差异明显（P<0.05）；（2）单纯LPS组释放TNF-的相对蛋白浓度最高，50ug/ml和100ug/ml两原花青素处理组TNF-的相对蛋白浓度低于单纯LPS诱导组（P<0.05），说明两种浓度作用下的原花青素均能很好的降低经LPS诱导的THP-1细胞释放TNF-的量；（3）50ug/ml和100ug/ml两浓度原花青素处理组进行组间比较，100ug/ml浓度组对TNF-的抑制效果更为明显（P<0.05），故选定该浓度用于蛋白水平的研究。4、（1）利用Western blotting检测原花青素对LPS刺激的p38蛋白的表达，不同处理组与空白对照组P-p38相对表达量存在显著差异（P<0.05）。LPS组P-p38相对表达量最高，原花青素处理组的表达量最低。（2）利用Western blotting检测NF-κB蛋白的表达，对不同组的蛋白相对表达量进行检测，发现不同处理组与空白对照组的结果存在显著差异（P<0.05）。LPS组THP-1细胞的NF-κB相对表达量最高，原花青素处理组的NF-κB相对表达量最低。该蛋白表达量在不同处理组的差异趋势与P-p38的Western blotting检测结果基本一致。结论：1、脓毒症是感染因素造成的全身炎症反应，细菌感染是脓毒症发病的主要原因，其中革兰氏阴性菌外膜的LPS是脓毒症的主要病原分子。本论文通过LPS诱导人THP-1细胞以建立脓毒症细胞模型，并证实了原花青素对脓毒症细胞模型具有显著的保护作用，且在较大的药物浓度范围内无毒副作用。2、原花青素可以有效的降低TNF-的释放，降低炎症反应的机制可能与p38MAPK所介导的炎症相关信号转导通路有关。