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本研究以治疗偏头痛的中药成方制剂天舒胶囊为研究对象,对其化学物质基础、质量控制方法、相关成分的药代动力学及天舒胶囊干预偏头痛模型大鼠的代谢组学进行了研究,为该制剂的临床应用提供了依据。研究内容如下:1.天舒胶囊化学成分的提取分离与结构鉴定采用溶剂萃取和各种色谱分离技术对天舒胶囊组方药材川芎与天麻的化学成分进行了提取分离与纯化;共得到10个目标化合物,并利用各种化学方法、现代光谱技术和文献对照进行了结构鉴定,分别为阿魏酸、咖啡酸、6,7-二羟基藁本内酯、4-羟基-3-丁基苯酞、洋川芎内酯、天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、对羟基苯甲酸和4,4’-二羟基二苄砜,为天舒胶囊成方制剂的质量标准和相关成分的药代动力学研究奠定了物质基础。2.天舒胶囊质量控制方法研究建立了 HPLC-DAD方法同时测定天舒胶囊组方药材不同比例配伍的合煎与单煎后混合样品中天麻素、对羟基苯甲醇、4,4’-二羟基二苄砜、阿魏酸、6,7-二羟基藁本内酯和4-羟基-3-丁基苯酞6个成分的含量,考察了天舒胶囊组方药材以两个配伍比例(川芎:天麻=4:1和1:1, g/g)制备时,合煎样品、单煎样品和单煎后混合样品中主要成分含量的变化;直观比较与统计分析的结果表明,当川芎:天麻以4:1和1:1 (g/g)配伍时,来源于天麻的天麻素、对羟基苯甲醇、4,4’-二羟基二苄砜和来源于川芎的4-羟基-3-丁基苯酞的含量在合煎液中有增大的趋势,且在合煎液4:1 (g/g)中的含量具有显著性差异,提示合煎工艺对天舒胶囊的部分化学成分有促溶作用,从化学成分角度解释了天舒胶囊中川芎与天麻以4:1 (g/g)合煎配伍的合理性。选取天舒胶囊中含量最高的3个化学成分天麻素、阿魏酸和6,7-二羟基藁本内酯为指标,建立了同时测定其含量的双波长切换-HPLC方法;结果表明,各批次化学成分含量较稳定,天麻素、阿魏酸和6,7-二羟基藁本内酯每粒含量分别在1.17～1.65 mg,0.84～1.47 mg和2.48～3.86 mg之间;其中,6,7-二羟基藁本内酯含量最高。所建立的方法简单、快速、准确,可用于控制天舒胶囊制剂的质量。3.天舒胶囊中相关成分的大鼠血浆药动学研究首次建立了同时测定大鼠血浆中天麻素和6,7--二羟基藁本内酯含量的HPLC-MS方法;以葛根素为内标,血浆以乙腈-甲醇(2:1,v/v)的混合体系为蛋白沉淀剂,采用电喷雾(ESI源)离子源,正离子方式检测;天麻素和6,7-二羟基藁本内酯分别在0.025-25 μg/mL和0.010-10 μg/mL范围内线性关系良好,定量下限分别为25和10ng/mL。建立了测定大鼠血浆中阿魏酸浓度的LC-MS/MS方法;以多西他赛为内标,血浆经乙醚萃取后,在ESI (-)模式下,选择多反应离子监测(MRM)进行分析;阿魏酸在2.5-4000 ng/mL范围内线性关系良好,定量下限分别为2.5 ng/mL。测定了大鼠分别灌胃给予川芎与天麻的合煎液(4:1, 1:1 g/g)以及相应药材单煎液后天麻素、6,7-二羟基藁本内酯和阿魏酸的血浆浓度,考察并比较了 3个化学成分在大鼠体内的药动学行为。结果表明:大鼠灌胃给予合煎液(4:1,1:1 g/g)和相应药材单煎液后,天麻素Cmax分别为 6.632 ±0.791,16.70 ±1.44, 8.37 ± 1.43, 20.83 ±2.09 μg/mL,Tmax 分别为 0.583 ±0.129,0.583 ± 0.129, 0.542 ±0.102,0.583 ±0.129 h,曲线下面积 AUC(0-t)分别为 13.13 ± 1.41,27.61 ± 1.77, 8.92 ± 1.09, 26.17±5.71 μg×h/mL, T1/2分别为1.85±0.49, 1.53 ±0.44,0.94 ±0.37, 1.33 ±0.24 h; 6,7-二轻基藁本内酯Cmax分别为 4.205 ±0.406,2.063 ±0.316,4.224 ± 0.596,2.756 ±0.313 μg/mL, Tmax分别为 0.750 ± 0.16,0.750 ±0.447,0.500 ±0,0.625 ± 0.137 h 曲线下面积 AUC(0-t)分别为 9.08 ±0.72, 6.937 ±0.386, 5.546 ±0.624, 4.144± 0.590 μg×h/mL,半衰期T1/2 分别为 2.37 ±0.54,1.40 ±0.24, 0.709 ±0.252, 0.548±0.047 h;阿魏酸Cmax分别为 1548 ±321,909± 106, 1707 ± 259,1088 ±204 ng/mL,Tmax 分别为 0.12 ±0.05, 0.14 ±0.04, 0.067 ± 0.026, 0.09 ± 0.04 h,曲线下面积 AUC(0-t)分别为 556.4± 69.3, 440.5 ±76.8,607.1 ± 138.6, 464.2 ±59.7 ng×h/mL,半衰期 T1/2 分别为 0.46 ±0.10,0.41 ±0.10,0.40 ±0.18, 0.45 ±0.15 h。通过组方药材川芎与天麻比例的变化和药动学参数的比较,大鼠分别灌胃给予合煎液和单煎液后,天麻素、6,7-二羟基藁本内酯和阿魏酸在大鼠体内的药动学行为具有显著性差异。4.天舒胶囊干预偏头痛模型大鼠的代谢组学研究应用皮下注射硝酸甘油法制备偏头痛大鼠模型,通过统计造模后2 h大鼠的挠头次数以及测定大鼠脑组织和血清中降钙素基因相关肽的浓度,确定造模成功。建立代谢组学研究的UPLC-MS方法,采用ACQUITY UPLCTMBEHC18色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,ESI正离子扫描,扫描范围m/z150～ 1200。应用建立的UPLC-MS方法对空白组、模型组、天舒胶囊给药组和氟桂利嗪给药组大鼠的脑组织、血清和尿液样品进行代谢物组分析,将得到的原始图谱数据经Masslynx软件处理,进行主成分分析(PCA)。散点分布图(Score plot)表明,造模后大鼠脑组织、血清和尿液的代谢物组与空白组偏离,得到很好的区分,而天舒胶囊给药组大鼠脑组织、血清和尿液的代谢物组均有向空白组方向回调趋势,表明天舒胶囊具有预防大鼠偏头痛的作用;根据负载图(Loading plot)筛选出脑中5个生物标记物,分别为3个溶血磷脂胆碱类成分C16:0 LPC, C18:0 LPC, C18:1 LPC和2个磷脂酰胆碱类成分,血清中6个生物标记物,分别为溶血磷脂胆碱类成分 C16:0LPC,C18:0LPC,C18:1LPC,C 18:2 LPC,C20:4LPC和胆酸,尿液中5个生物标记物,分别为黄尿酸、犬尿酸、马尿酸、苯乙酰甘氨酸和N2-琥珀酰-L-鸟氨酸,并对溶血磷脂胆碱、磷脂酰胆碱、胆酸、黄尿酸和犬尿酸与偏头痛发生的机制进行阐释,说明其与偏头痛发生的关系,从代谢组学的角度揭示了天舒胶囊干预偏头痛模型大鼠的机理。