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慢性炎性疼痛是由多种原因所引发中枢或外周组织异常导致的一种持续性的疼痛状态。临床上常使用阿片类药物或非甾体类抗炎药物治疗,但这些药物大都存在副作用多或者疗效不佳等缺陷,长期的慢性疼痛折磨严重降低了患者的生存质量,因此寻求其他安全、有效的治疗药物对我们来说迫在眉睫。Spalt样转录因子1(spalt like transcription factor 1,Sall1)是小胶质细胞(Microglia,MG)的标签基因,是MG最为重要的一种转录抑制因子,现有研究证实多种转录因子通过信号特定的方式共同调节MG的反应表型,在疼痛的发生发展中发挥着重要作用,有研究发现Sall1可能在SNI小鼠模型中对痛阈产生影响,因此推测Sall1是否在慢性炎性痛也发挥重要作用。目的:(1)构建Sall1过表达腺病毒载体,并验证其转染效率,为后续实验提供可靠的实验基础;(2)建立小鼠慢性炎性痛觉过敏模型,观察小鼠炎性痛觉过敏模型下的Sall1表达变化情况,分析Sall1变化与小鼠痛阈变化的关系;(3)鞘内注射Sall1过表达腺病毒,研究炎性疼痛模型下高表达Sall1小鼠的痛阈变化,进一步明确Sall1与痛阈的联系,以进一步探讨Sall1是否通过调控MG来影响疼痛及其作用机制。方法:(1)使用GenBank得到Sall1的基因序列,将目的基因与工具载体(pSB50)连接得到穿梭质粒,再将其与辅助包装质粒(pBHG loxΔE1,3 Cre)共转染HEK293细胞获得重组腺病毒,最后使用RT-PCR检测Sall1验证转染效率。(2)雄性BALB/c小鼠建立完全弗氏佐剂(complete Freund’s aduvant,CFA)炎性疼痛模型,小鼠左后趾皮下注射30μlCFA试剂。Von Frey纤毛测量小鼠在CFA建模前后的50%机械缩足阈值变化。(3)在CFA建模第二天经Von Frey纤毛检测建模成功后,通过鞘内注射上调脊髓Sall1表达的腺病毒,分别测量CFA组以及O-Sall1组、E-Sall1组小鼠给药前后的机械痛阈变化情况。以及使用Western-blot、RT-qPCR检测CFA小鼠使用腺病毒治疗前后小鼠脊髓Sall1的变化情况。结果:(1)菌液PCR鉴定基因连接成功,同时,测序结果显示与GeneBank公布的序列一致;Sall1过表达质粒PSE3940转染HEK293细胞样品,结果显示,Sall11基因过表达效果明显,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组Sall1表达明显增高,其差异有统计学意义(P<0.05),提示过表达质粒构建成功。(2)CFA小鼠建模患侧可见足部红肿表现。建模后小鼠左侧足底机械缩足反应阈值(mechanical paw withdrawal threshold,MWT)较NS组以及正常组相比明显下降,建模后1天下降最明显,此后痛阈缓慢上升;与建模1天相比,CFA组小鼠建模第7天Sall1蛋白表达量呈上升趋势,至建模17天痛阈恢复时,Sall1mRNA表达量及蛋白表达量均恢复至建模前水平。(3)鞘内注射腺病毒治疗的CFA小鼠机械痛阈在给药后3d、5d、7d、9d较CFA组小鼠升高,11d起与CFA组无差异,证明鞘内注射腺病毒可缓解小鼠疼痛;O-Sall1组小鼠鞘内注射Sall1过表达腺病毒后各同一时间点较E-Sall1组SallmRNA表达量及蛋白表达量均升高。结论:皮下注射完全弗氏佐剂的雄性小鼠患侧MWT明显下降,表明慢性炎性痛模型建立成功,并且Sall1表达水平下降,Sall1表达水平变化与痛阈变化相一致;鞘内注射Sall1过表达腺病毒提高Sall1表达可提高慢性炎性痛小鼠MWT,Sall1参与慢性炎性痛的调控。