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本研究拟用分子生物学的方法,对PSMA的剪接变异体进行系统分析,了解其多样性及生物学意义,并对其临床意义进行初步探讨,为深入研究前列腺癌的发生机制和寻求前列腺癌有效的诊断标志物、治疗靶点提供新的思路和理论依据。
本文从泌尿系肿瘤细胞株、CHO细胞株或前列腺组织中提取总RNA,逆转录合成cDNA。根据PSMA的基因序列设计引物,PCR扩增cDNA;PCR产物凝胶回收纯化后和T载体连接,转化大肠杆菌DH5α。挑选并鉴定氨苄青霉素抗性的阳性克隆,增菌测序并进行BLAST分析。根据可变剪接插入和缺失序列的有无,将PSMA及其变异体分为Insert和Delete两组,通过实时荧光定量PCR技术,比较两组在不同前列腺组织中的表达。