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背景:细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis,BV)是育龄妇女常见的阴道感染性疾病,是阴道中占优势的乳酸杆菌生长受抑制而多种厌氧菌、阴道加德纳菌、支原体等大量繁殖导致的临床综合征。BV并非特异性感染,不是阴道炎而是菌群失调所致的多微生物病,因此对阴道菌群特征的研究是诊断治疗BV的关键。近年来,以聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)、细菌16SrRNA基因序列分析为代表的分子生物学技术在阴道菌群研究中得到了广泛应用,一些与BV关系密切的新细菌被发现,这为研究复杂的阴道菌群特征,建立BV分子诊断方法提供了可能。
目的:调查阴道细菌在健康育龄妇女(对照组)和BV患者(BV组)阴道分泌物标本中的分离率。比较两组标本中的5种乳酸杆菌和3种厌氧菌16SrRNA基因拷贝数量的差异。通过对BV相关病原体进行定量和定性检测,认识细菌性阴道病菌群的交化特征,建立BV的分子诊断方法。
方法:173例阴道分泌物标本收集自BV患者(91例)和健康育龄妇女(82例),提取标本中的细菌基因组DNA,采用细菌特异性16SrRNA基因PCR检测标本中的卷曲乳酸杆菌、阴道加德纳菌、人型支原体等11种病原体。通过T-A克隆构建的重组质粒,制备荧光定量PCR的标准品。对两组标本中的5种阴道乳酸杆菌,3种厌氧菌进行定量检测。比较两组标本中3种厌氧菌分离率和16SrRNA基因拷贝数量的差异,绘制ROC曲线对三种厌氧菌的BV诊断效能进行评价。
结果:纤毛菌属、阴道阿托波菌属、巨球菌属、羞怯动弯杆菌属与BV密切相关,其对BV的诊断特异性分别为85.4%、93.9%、95.1%、91.4%;联合检测巨球菌属、纤毛菌属、羞怯动弯杆菌属作为BV判断指标时,敏感度为92.3%(84/91),特异度为89.0%(73/82)。健康妇女阴道乳酸杆菌的分离率达到96.9%,其中卷曲乳酸杆菌分离率66.0%、惰性乳酸杆菌43.2%。健康育龄妇女阴道乳酸杆菌16SrRNA基因拷贝数量(Log10 copies/ml)为6.13±1.82,其中卷曲乳酸杆菌数量最多,为5.24±3.07,是阴道中的主要优势菌。BV组与对照组比较,卷曲乳酸杆菌的数量显著减低(P<0.05)。二路普雷沃菌、脆弱拟杆菌、阴道阿托波菌的数量均显著增加(P<0.05)。评价3种厌氧菌诊断效能的ROC曲线下面积分别为0.857、0.842、0.917。
结论:BV为多种病原体的混合感染,通过16SrRNA基因PCR检测主要致病菌或致病菌组合,可以有效的对BV进行分子诊断。卷曲乳酸杆菌和惰性乳酸杆菌是健康妇女阴道中的主要乳酸杆菌,卷曲乳酸杆菌数量占绝对优势。BV患者阴道中的卷曲乳酸杆菌明显减少。阴道阿托波菌的定量检测对BV具有较好的诊断效率。