人巨噬细胞集落刺激因子干细胞因子融合蛋白的构建及其在昆虫细胞中的表达

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干细胞因子(SCF)对各种集落刺激因子均有协同作用.应用重组DNA技术构建5端为人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)编码区,3端为人SCF编码区,中是间12个氨基酸的连接肽编码区的融合基因M-CSFSCF并其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pVL1392中.通过与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)DNA共转染草地夜蛾细胞Sf9后,融合基因插入AcNPV基因组中.感染该重组病毒的Sf9单层培养细胞可以分泌表达M-CSF/SCF融合蛋白.培养上清中M-CSF活性为2.99×10<4>CFU/ml培养液,SCF活性为290units/ml培养液,说明融合蛋白具有M-CSF和SCF的双重活性?Western Blot显示表达产物在还原条件下分子量为38kD,在非还原条件下分子量为76kD,表明该融合蛋白为共价连接的同源二聚体.在M-CSF/SCF融合蛋白中还可以检测到SCF部分对M-CSF部分的协同作用.
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