PI3K/c-Src/FAK信号转导通路在九香虫干预锰暴露大鼠睾丸损伤中的作用

来源 :遵义医学院 | 被引量 : 4次 | 上传用户:wrothnpc
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目的:检测PI3K/c-Src/FAK信号转导通路中相关蛋白粘附斑激酶(Focal adhesionkinase,FAK)、类固醇受体共激活因子(Steroid receptor coactivator,Src)及紧密连接蛋白在大鼠睾丸组织中的表达,来探讨该信号转导通路在九香虫干预锰暴露大鼠睾丸损伤中的作用及其机制。方法:将60只成年雄性SD大鼠按照随机分组表随机分为空白组、模型组、九香虫低、中、高剂量干预组及阳性组。除空白组腹腔注射等容积生理盐水外,其余各组均腹腔注射15 mg/kg的MnCl2溶液(30 d);同时九香虫低、中、高剂量干预组分别按照50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg灌胃九香虫溶液,阳性组按照1.25 g/kg灌胃金匮肾气丸水溶液(30 d)。1.生殖能力指标检测精子数目、生殖腺(睾丸、附睾、精囊腺+前列腺、提肛肌、包皮腺)的脏器系数;2.行为学实验观察15 min之内雄性大鼠的交配行为指标,包括扑捉、骑跨、插入及射精的潜伏期与次数;3.光镜和电镜下观察睾丸的组织形态学结构变化;4.qRT-PCR检测睾丸组织中Fak、c-Src及Claudin1 mRNA的表达变化;5.Western Blot检测睾丸组织中p-FAK、p-Src及紧密连接蛋白(Claudin1、Occludin、ZO-1和JAM-A)的表达情况。结果:1.九香虫干预对锰暴露大鼠精子数目、生殖腺脏器系数的影响:与空白组相比,模型组大鼠精子数目及各器官脏器系数均有明显的降低,其中精子数目、睾丸、附睾及包皮腺脏器系数差异具有统计学意义(P<0.05);经不同剂量九香虫干预以后,其精子数目及各器官脏器系数均有所提高,其中九香虫中剂量干预组的精子数目、提肛肌及包皮腺的脏器系数具有统计学差异(P<0.05)。2.九香虫干预对锰暴露大鼠交配行为的影响:与空白组相比,模型组大鼠的扑捉、骑跨、插入及射精潜伏期明显延长且次数明显减少(P<0.05);经不同剂量九香虫干预后,锰暴露大鼠的扑捉、骑跨、插入及射精潜伏期显著缩短且次数明显增加(P<0.05)。3.九香虫干预对锰暴露大鼠睾丸的组织形态结构的影响:HE结果显示,与空白组相比,模型组大鼠生精小管内各级生精细胞排列紊乱且数目与层次均明显减少,可观察到管腔明显空泡化,管腔中成熟的精子细胞少见;而九香虫干预后,睾丸组织生精小管的基膜比较完整,生精小管中各级生精细胞排列紧密有序,管腔的空隙逐渐变小,可看到管腔中有成熟的精子细胞存在;高倍镜下观察,模型组睾丸组织生精小管中很难辨认出支持细胞。电镜结果表明,与空白组相比,模型组睾丸组织精原细胞萎缩,致使精原细胞与支持细胞的间隙明显增宽;此外,支持细胞内细胞器及血睾屏障(BTB)变化明显,主要表现为线粒体肿胀、空泡,内质网明显扩张以及血睾屏障解体、断裂。经九香虫干预后,精原细胞与支持细胞的形态趋于空白组,肿胀的线粒体及扩张的内质网明显好转,可以看到较连续的BTB。4.PI3K/c-Src/FAK信号通路相关分子在九香虫干预对锰暴露大鼠睾丸组织中的表达变化:与空白组相比,模型组大鼠Fak与c-Src mRNA的表达显著上调(P<0.05),Claudin1 mRNA的表达则显著下调(P<0.05);同时,p-FAK的蛋白表达量显著增加(P<0.05);而紧密连接相关蛋白(Claudin1、JAM-A及Occludin)的表达量则显著降低(P<0.05)。九香虫干预后,抑制Fak mRNA的表达,继而p-FAK的蛋白表达量显著下降(P<0.05),而Claudin1 m RNA表达上调的同时,被破坏的紧密连接相关蛋白(Occludin、Claudin1、ZO1及JAM-A)的表达量显著增加,改善血睾屏障的通透性,进而改善了生精微环境。结论:1.九香虫干预可以改善锰暴露大鼠的生殖能力及交配行为能力。2.九香虫干预可以明显改善锰暴露大鼠支持细胞的形态结构,有利于支持细胞对生精细胞的支持与保护。3.九香虫干预对锰暴露大鼠睾丸组织干预作用的机制:可能是通过抑制锰暴露激活的PI3K/c-Src/FAK信号转导通路中关键因子FAK,使磷酸化的FAK去磷酸化,并增加支持细胞紧密连接相关蛋白的表达来实现的。
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