维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)是一种重要的人鱼共患病原菌,不仅可以引起多种水产生物的大量死亡,也可以感染人类,对水产养殖业以及公共安全卫生均有重大的危害。但是如今针对维氏气单胞菌并没有良好的防治方法,因此开发其疫苗的工作迫在眉睫。Ⅲ型分泌系统(T3SS)是革兰氏阴性菌中普遍存在的蛋白分泌机制,是细菌毒力因子产生致病效果的重要途径。AraC型DNA结合蛋白ExsA则是T3SS的主要激活因子之一,对T3SS相关蛋白的表达至关重要。有研究报道反式翻译的核心元件smpb和tmRNA以及RNA分子伴侣蛋白Hfq的缺失都可能导致减毒株的形成。ExsA已有一定的研究报道,但是在维氏气单胞菌中尚未进行相关研究。本论文基于实验室自行分离保存的维氏气单胞菌C4为研究对象,用同源双交换法构建维氏气单胞菌exsA敲除型菌株AexsA,并测定其生长曲线,结果表明exsA基因的敲除对维氏气单胞菌的生长没有明显影响。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了 exsA缺失后其上下游exsB、exsC、exsD、exA的表达水平,发现均有一定的变化,但是差异不显著,可能是这几个基因构成了复杂的级联调控,单一因素的变化不能产生明显的影响。用△exsA对尼罗罗非鱼(Oreochromis nilOticus)腹腔注射攻毒实验并计算其半致死浓度(LD50),发现相比野生型毒力下降了 28.23倍。用野生型及△exsA攻毒一周内后,测定罗非鱼内脏碱性磷酸酶(AKP)以及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,发现该两种酶的活性均发生了先升后降的变化趋势,证明了 AexsA可以在不致死的情况下引发机体的免疫反应,有进一步开发成为减毒活疫苗的潜力。此外,本研究对已经构建好的△smpB、△tmRNA、△hfq三个缺失突变株,进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR),验证了它们毒力及毒力相关基因表达变化。罗非鱼腹腔攻毒计算半致死浓度(LD50),其中△smpB毒力下降2.24倍,△tmRNA毒力下降了 6.32倍,△hfq毒力下降了 20倍,因此△hfq也具有一定开发减毒活疫苗的潜力。这些研究结果将为进一步开发维氏气单胞菌减毒活疫苗提供理论基础。