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目前公认白血病耐药与复发的根本原因是由于患者体内残存有白血病干细胞(leukemic stem cell, LSC)。一般传统的化疗药物只能清除大部分白血病细胞,而对具有自我保护机制的LSC不敏感,使得我们当前使用的许多化疗药物不能从根本上治愈白血病,因此寻找针对LSC的治疗措施至关重要。近年来生物免疫治疗已成为研究热点,特别是有关DC和CIK联合针对各种肿瘤细胞的免疫治疗研究很多,已被众多学者认为是具有较大潜力的治疗措施。本实验的特色即在于通过干细胞来源DC与CIK联合对白血病细胞株干细胞进行杀伤,探讨其杀伤与凋亡机制,从而为研究针对LSC的治疗方法提供一定的实验基础。目的证实慢性粒细胞白血病(CML)源干细胞能体外扩增诱导生成树突细胞(DC),且该DC具有CML干细胞的特征；分析DC、CIK共培养前后细胞免疫表型的变化；探讨其与相同CML来源的CIK共培养,对白血病耐药株K562/A02干细胞的杀伤及凋亡作用,从而为细胞免疫治疗清除LSC提供一定的理论基础和实验依据。方法用Ficoll淋巴细胞分离法提取BCR/ABL阳性表达的CML患者骨髓的单个核细胞(BMMC),利用流式分选技术分离纯化CD34+CD38-白血病干细胞(LSC),利用细胞因子体外扩增诱导生成DC。取相同来源的CML骨髓提取单个核细胞诱导出CIK。DC与CIK按1：10的比例共培养,通过流式细胞术(FCM)检测其对白血病耐药株K562/A02干细胞的凋亡及杀伤情况。光镜下观察DC、CIK细胞形态,电镜下观察DC超微结构,FCM分析DC和CIK共培养前后细胞免疫表型变化、K562/A02及DC的P-糖蛋白(P-gp)表达情况,荧光原位杂交(FISH)技术检测BCR/ABL融合基因在LSC及DC中的表达。结果1.白血病干细胞能成功诱导为成熟DC且该DC具有CML-LSC的特征LSC诱导后的DC可见大量伸展的树突状毛刺,为典型的树突细胞形态；电镜下观察具备成熟DC的典型特征；DC的P-gp表达阳性率为51.8%左右,BCR/ABL融合基因阳性率为(48.87+18.44)%,因此DC具备CML-LSC的特征。2.DC共培养前后细胞免疫表型变化共培养后DC免疫表型CD40、CD80、CD83、CD86及HLA-DR的表达率均高于共培养前；DC共培养前上述免疫表型的表达率分别是(41.08±2.35)%、(41.21+2.56)%、(32.28±3.19)%、(50.74+1.72)%、(49.65±2.29)%,共培养后升高至(71.24±2.20)%、(62.42±3.03)%、(68.09±2.83)%、(71.28±2.66)%(61.11±3.32)%,差异有统计学意义(P<0.01)。3.CIK共培养前后细胞免疫表型变化共培养后CIK的CD3CD8、CD3CD56免疫表型表达率均高于共培养前；共培养前分别是(46.65±3.91)%、(21.58±2.88)%,共培养后分别是(59.35±3.77)%、(37.50±4.46)%,差异有统计学意义(P<0.01)。4.DC与CIK共培养可增强CIK对CD34+CD38-细胞的杀伤效应CIK组、DC-CIK组分别与K562/A02细胞共培养后,流式细胞术检测CD34+CD38-细胞所占比例分别为(3.30±0.27)%、(1.75±0.31)%,空白对照组为(4.23±0.37)%,差异有统计学意义(F=64.470,P<0.01),CIK组、DC-CIK组均低于空白对照组,DC-CIK组低于CIK组(均P<0.01)。5.CIK、DC-CIK对K562/A02细胞及其干细胞的凋亡诱导效应CIK组、DC-CIK组对K562/A02细胞有明显诱导凋亡作用,凋亡率由(32.56±3.20)%升至(40.21±3.09)%,差异有统计学意义(P<0.01)；而对其中CD34+CD38-细胞无明显作用。结论LSC来源DC具有CML干细胞的特征,同时LSC来源DC联合CIK能杀伤CML耐药细胞株干细胞,且对K562/A02细胞有明显诱导凋亡作用,但对其干细胞无明显诱导凋亡作用。