随着沿海地区人口密度的增加,禽畜养殖业的蓬勃发展,粪便污染己成为一个严重的环境问题。粪便污染带来的有机物、致病菌等,不仅降低海水质量,影响海水养殖业,同时也给人类的健康带来威胁。粪便污染源往往以非点源污染形式存在,具有分散性和随机性,因此解决近岸海域粪便污染问题的关键是找到并确认其污染源。 为了解决近岸海域粪便污染问题,本论文采用一种利用粪便微生物追踪其污染源的方法——微生物源示踪法。此方法中,基因型示踪技术比较可靠,结合DNA“指纹”(DNA Firlgerprint)技术,通过比对同种细菌表现出的遗传多样性“指纹”图谱,追踪其所在宿主或生存环境,达到污染源示踪的目的。整个实验过程包括,从粪便中分离示踪微生物(E.coli),提取基因组DNA,进行16S-23S rRNAISR PCR扩增,PAGE电泳,以及图像数据分析,通过特异性DNA“指纹”条带找出细菌与污染源的联系,最终完成粪便污染源的示踪。 本论文总结出一套快速分离示踪微生物的方法;初步摸索到适用于本实验的16S-23S ISR PCR和PAGE条件;利用PAGE:构建出不同来源E.coli的DNA“指纹”图谱,通过比较E.coli共性和特异性“指纹”带,找出示踪微生物在不同来源粪便中的多态性,为进一步粪便污染源示踪研究提供理论基础和科学依据。