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目的 本实验试图从细胞生物学和动物实验以及临床实验研究三个不同的方面,研究表皮生长因子在皮肤扩张术中的作用,以探讨皮肤扩张术中皮肤扩张的机理,为其在临床中的应用提供实验依据。 方法 (1) 利用细胞培养技术,酶消化法原代培养表皮细胞,传至第3-4代,待细胞生长铺满率达60-70%后,将实验分为二组:实验组和对照组,实验组采用细胞负压牵引装置,在250mmHg的压力下,以牵拉3秒,松弛3秒,每分钟循环10次的作用方式下实施牵拉,对照组细胞不受牵拉,连续观察72h,分别于12h、24h、36h、48h、60h、72h,收集细胞培养液,同时于72h观察表皮细胞在牵拉条件下和非牵拉条件下的生长情况;用ELISA法测定表皮细胞在牵拉条件下和非牵拉条件下分泌EGF的情况;(2) 以猪作为皮肤扩张动物模型,实验分为对照组即外用基质组,用药Ⅰ组即外用EGF霜剂组,外用含不同浓度促透剂的EGF霜剂组即含0.5%促透剂用药Ⅱ组和含1%促透剂用药Ⅲ组,每组在同样扩张条件下于扩张器皮肤表面每日涂抹外用软膏,计算每组皮肤扩张率和扩张囊的注水量,同时对扩张后皮肤组织进行HE染色,观察每组扩张皮肤的组织学变化;(3) 利用免疫组织化学技术ABC法以及Western blotting方法,对人不同扩张皮肤和正常皮肤磷酸化ERK的分布和表达进行测定,并对结果进行图像分析。 表皮生长因子促进皮肤扩张术组织扩张机理及方法研究 结果:(l)在实验组中表皮细胞经72小时牵拉后生长良好,且较密集,可见大量细胞集落,而对照组的细胞己死亡,可见大量的细胞碎片,实验组牵拉36 ’J\时EGF浓度为16刀3pg/ml,其它时间点未测到,而非牵拉组各时间点均未测出EGF(二)在皮肤扩张率和扩张囊注水量方面,用药*组和用药*组明显高于对照组和用药1组,同时HE染色进一步证实用药*组和用药*组中皮肤表皮细胞增生明显活跃。()扩张皮肤和正常皮肛表皮基底层都有磷酸化ERK的表达和分布,但扩张皮肤中的磷酸化ERK的分布和表达较明显,染色较深且密,部分阳性细胞呈多层排列,有散在的增殖团区,通过Western blotting方法,证实扩张皮肤包括胸部及颖部中磷酸化ERK表达高于正常皮肤组织;扩张皮肤的顶部和侧部差别不十分明显,而侧部和顶部与基底部有一定的差别,基底部染色较深,多为细胞核着色;对正常皮肤和不同部位的扩张皮肤以及扩张皮肤的不同部分的相对灰度值和阳性细胞密度的图像分析,进一步证实了上述观察结果。 结论:()牵拉不但可促进表皮细胞的增殖和生长,而且可能促进表皮细胞分泌 EGF(2)外源性表皮生长因子可促进扩张皮肤的增殖,可明显地提高皮肤的扩张速率;(3)扩张皮肤表皮细胞磷酸化ERK增加,椎测磷酸化ERK可能在扩张皮肤细胞增殖过程中发挥一定的作用,在扩张刺激的作用下,表皮细胞内的Eng被大量激活,随即激活下游分于,进而引起细胞的增殖,最终实现皮肤的扩张。