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背景:氧化应激(Oxidative Stress,OS)是多种肝损伤疾病的重要机制,参与炎症和肝纤维化过程,在非酒精性脂肪肝病、酒精性肝病发病机制中起着重要作用,与病毒性肝炎所致的肝损伤也密切相关。我国居民肝病患病率高,但是在抗肝氧化损伤方面的西药匮乏,亟待研发。中药在预防和治疗肝损伤方面有着独特的优势,临床上应用清热祛湿类中草药预防和治疗肝损伤疗效显著,另外,从天然植物中提取的中药单体因其结构明确,来源广泛,毒副作用小,愈发受到广泛的关注,既往多项研究显示某些中药的有效成分具有抗氧化作用,因此选择中药单体作为研究切入点,对于实现中药的现代化和国际化意义重大。龙胆苦苷(Gentiopicroside)主要是从龙胆草和秦艽两种中草药中提取出来的一种环烯醚萜类化合物,具有抗炎解热、抗病毒、保肝利胆护胃作用,但其具体作用机制尚未阐明。目的:研究龙胆苦苷对过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞氧化损伤的作用及其分子机制,为中药单体治疗肝损伤提供实验基础。方法:使用H2O2诱导HepG2细胞6 h建立氧化应激模型,利用CCK8法测定龙胆苦苷对HepG2活力的影响,然后进行实验分组:空白对照组,H2O2模型组,低、中、高浓度龙胆苦苷保护组(10μmol/L、20μmol/、40μmol/L),生物试剂盒检测细胞内产生的丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,荧光共聚焦检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,Westem blot法检测细胞Nrf2蛋白表达水平及龙胆苦苷对HepG2细胞中Nrf2激活的分子机制。结果:1.使用不同浓度梯度H2O2诱导HepG2细胞6 h建立氧化应激模型,H2O2的浓度成倍数升高,结果显示低浓度组H2O2对HepG2的存活率影响较少,但是随着H2O2的浓度升高,细胞存活率显著降低,经过统计分析得出IC50为798.3 μmol/L,所以本实验选择使用800μmol/L作为造模浓度。2.依次使用10μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L三个浓度龙胆苦苷作用于HepG2细胞12 h,通过CCK8法检测显示三个浓度龙胆苦苷对H2O2造成细胞氧化损伤均有保护作用。3.模型组HepG2细胞内MDA水平显著高于空白组(0.8767±0.03786 nmol/104 vs 0.5533±0.06028 nmol/104,P<0.01),而龙胆苦苷40 μmol/L预先处理后细胞内MDA水平(0.7367±0.05508nmol/104)较模型组显著降低(P<0.05)。4.模型组细胞内ROS的平均百分率显著高于空白组(92.67±2.08%vs50.33±2.08%,P<0.05),1 0 μmol/L、20μmol/L、40μmol/L龙胆苦苷治疗组细胞内ROS平均百分率依次为(88.33±2.08)%,(87.00±2.00)%,(62.67±5.69)%,较模型组显著降低,龙胆苦苷可以剂量依赖性减少H2O2造成的氧化损伤。5.龙胆苦苷可以增加细胞核内Nrf2的蛋白量,增加AKT磷酸化,激活PI3K/AKT信号通路。结论:1.龙胆苦苷对H2O2诱导的氧化损伤有保护作用,且成剂量依赖性。2.龙胆苦苷可以通过激活PI3K/AKT信号通路,调节Nrf2核内转移的分子机制发挥抗氧化作用。