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目的:观察槐耳清膏分别联合紫杉醇(Paclitaxel,Taxol,PTX)、洛铂(Lobaplatin,LBP)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响并探讨其联合用药的作用机制。
方法:本实验以体外培养的MCF-7乳腺癌细胞为研究对象,将槐耳清膏分别与紫杉醇及洛铂以两药联合以及各药单独给药方式,作用于人乳腺癌MCF-7细胞,观察不同给药方式对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。1.采用四甲基偶氯唑蓝还原法(MTT)观察槐耳清膏、紫杉醇、洛铂各药单独给药方式对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响;2.采用四甲基偶氯唑蓝还原法(MTT)观察槐耳清膏分别联合紫杉醇、洛铂的两药联合方式对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响;3.采用流式细胞术(FCM)检测槐耳清膏分别与紫杉醇及洛铂以两药联合以及各药单独给药方式对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡率和细胞周期的影响;4.采用克隆形成实验检测槐耳清膏分别与紫杉醇及洛铂以两药联合以及各药单独给药方式对人乳腺癌MCF-7细胞计数形成克隆数、计算克隆形成率,并采用倒置显微镜观察不同给药方式对人乳腺癌MCF-7细胞形态学的影响。
结果:
1、MTT比色结果显示槐耳清膏、紫杉醇、洛铂各药单独给药方式对人乳腺癌MCF-7细胞均具有明显的抑制增殖作用,并呈剂量依赖性。
2、MTT比色结果显示加入槐耳清膏的联合用药组的抑制作用强于紫杉醇、洛铂各药单独给药组,差异有统计学意义(P值均<0.05)。
3、流式细胞仪检测各给药组凋亡率均升高,较细胞对照组差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组凋亡率较各单药组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。
4、紫杉醇单药组及联合组G2/M期比例均升高,S及G0/G1期比例均下降,较细胞对照组差异均有统计学意义(P<0.05);紫杉醇联合组较单药组G2/M期比例升高,S及G0/G1期比例下降,差异有统计学意义(P<0.05)。洛铂单药组及联合组G0/G1期比例均升高,S期比例均下降,较细胞对照组差异均有统计学意义(P<0.05);洛铂联合组较单药组G2/M期比例升高,G0/G1及S期比例下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
5、克隆形成实验结果显示,与细胞对照组相比,各用药组均未有细胞克隆形成,提示用药后细胞的克隆形成能力明显下降。
结论:
1、槐耳清膏、紫杉醇与洛铂均能抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞。联合用药组较单药组抑制作用更为明显,显示槐耳清膏对紫杉醇、洛铂的化疗具有增敏作用。
2、槐耳清膏联合紫杉醇、洛铂用药能抑制人乳腺癌MCF-7细胞的克隆形成。
3、槐耳清膏与紫杉醇、洛铂联合应用对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡具有协同作用。槐耳清膏联合紫杉醇用药通过诱导凋亡而抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞生长,其机制可能与细胞G2/M期阻滞有关;而槐耳清膏联合洛铂用药通过诱导凋亡而抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞生长,其机制可能与细胞G0/G1期阻滞有关。