基于核酸-蛋白质缀合物的细菌表面核酸修饰方法研究

来源 :湖南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wef123456
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
细菌表界面上的动态变化对于细菌间通讯、细菌生存和菌群结构中起着关键作用。开发合适的细菌表面修饰工具,对于了解细菌的通讯机制,研究细菌与细菌、宿主、环境之间的相互作用意义重大。DNA作为一类具有可编程组装功能和高空间精度的材料,目前已被研究者们广泛应用于哺乳动物细胞膜界面的生化调控,但将其用于细菌表界面的工作还刚刚起步。为了实现DNA纳米材料在细菌表面的功能化修饰,本论文开发了两种核酸-蛋白质缀合物工具,利用蛋白质作为锚定基底,成功将功能DNA分子锚定在细菌表面,且不影响DNA链本身的碱基互补配对功能,为后续利用DNA调控细菌群体行为打下了基础。本论文主要的研究内容如下:(1)我们基于核酸与凝集素的共价缀合物,开发了第一种细菌表面DNA修饰工具。我们利用凝集素刀豆蛋白(Con A)对于甘露糖单元和葡萄糖单元具有特定的特异性结合能力,识别细菌表面高丰度的碳水化合物,通过共价缀合物,将DNA锚定在细菌表面。我们利用共价偶联方法合成了DNA-Con A缀合物,并对缀合物的纯度以及分子量进行了系列表征。随后,我们利用缀合物成功将DNA探针锚定在大肠杆菌表面,并证明了表面修饰DNA的碱基互补配对功能。该缀合物还可对金黄色葡萄球菌表面进行修饰,证明了该方法具有一定的普适性。(2)我们选择了一种核酸内切酶Gene A*蛋白,利用它可特异性识别并且剪切偶联特定核酸序列的性质,开发了第二种细菌表面DNA修饰工具。我们利用基因工程方法,在大肠杆菌表面通过Gene A*-Blc重组蛋白体系直接展示了Gene A*蛋白,通过简单的共孵育,就可以通过细菌表面形成DNA-Gene A*缀合物,将DNA锚定在细菌表面。我们对基因工程菌的高活性菌种、诱导培养条件以及核酸孵育条件分别进行了筛选和优化。我们证明了在诱导培养后,基因工程菌表面展示的Gene A*酶蛋白具有一定酶活性,可以特异性剪切结合DNA链,同时证明了表面修饰的DNA具有碱基互补配对功能。我们成功在m Cherry、GFP、BFG三种荧光工程细菌表面表达了Gene A*,并利用DNA的碱基互补配对功能实现了多细菌聚集体的形成。综上所述,本论文利用共价偶联缀合物以及酶促偶联方法开发了两种核酸-蛋白质缀合物工具,实现了DNA在细菌表面的功能化修饰,对将来研究细菌活体生物材料、细菌群体效应、细菌生物传感器等具有重大意义。
其他文献
当下,围绕"2030年实现碳达峰、2060年实现碳中和"的宏伟目标,全国各行各业都在积极推动能源低碳转型,这也为创新型绿色低碳技术提供了良好的成长土壤。作为热储能技术皇冠上的明珠,经过多年发展,不断突破并趋于成熟的熔盐储能技术也迎来了发展良机。通过配置灵活可调的储热模块,熔盐储热系统可以高效利用廉价谷电和风电光伏等可再生能源弃电实现清洁供热,在有效削弱供热对化石能源依赖、助力可再生能源消纳的
期刊
主问题教学作为一种简约、有效的课堂样式被应用在学科教学中,给教学观念和教学方式变革带来新的机遇,受到我国教育界的普遍关注。已有的研究视角主要集中在主问题教学的现实意义、内涵特征、基本原则、实施策略等方面,取得了一定的进展,同时也存在些许不足。结合我国主问题教学的实际和研究现状,今后主问题教学的研究应凸显实证研究、评价体系建设和研究团队协同。
EPC是指从事工程总承包的企业受业主委托,按照合同约定对工程项目的勘察、设计、采购、建设施工、试运行(竣工验收)等实行全过程或若干阶段的承包。本文结合海南省陵水县某新建二甲综合医院EPC项目,阐述了EPC模式下医院项目医疗专项设计管理实施过程,分析了医疗专项设计管理组织需求,总结了医疗专项设计管理要点,以期为类似项目提供借鉴。
随着社会经济的不断发展,人们的生活水平以及生活质量都有了相当大的提高,人们追求的往往不再是物质方面的内容,更多的是精神层面的内容,这就使得旅游行业有了更多的发展机会。为了更好地满足人们的旅游需要,智慧旅游就得到了大规模的运用。智慧旅游的出现为传统旅游行业的发展起到了非常重要的促进作用,使得旅游业能够更好地发展。因此,旅游企业在日常的经营过程中要充分地运用智慧旅游,对传统旅游的管理方式进行创新,追求
构建集中统一、全面覆盖、权威高效的审计监督体系,是党中央、国务院对审计工作提出的明确要求,也是新时代审计工作发展的需要。构建完善的审计监督体系,是实现国家治理体系和治理能力现代化的有力保证。
近年来,伴随着科学技术的快速发展与革新,客户群体的需求、商业行为等都出现了巨大的变化,在此背景下,企业需要加大创新商业模式、运营模式的力度,以促使企业获取更大化的经济利益,助力企业增强革新竞争实力。新技术、新理念的提出,为企业推动数字化转型发展提供了有力支持,所以,深入研究企业数字化转型发展框架,并探索数字化转型发展的有效路径,对企业而言,有着十分重要的现实意义。现阶段,数字化转型发展已经成为越来
增材制造可以满足航空航天领域对零件的高复杂性、高性能、轻量化以及多功能化的要求,但其制造复杂金属零件时在综合性能、表面质量和成形精度上仍然存在不足,必须经过表面抛光处理才能达到航空航天零件高使役性要求。通过综合国内外文献资料,详细介绍了化学抛光、电解抛光、磨粒流抛光和激光抛光这4种可达性较强的表面抛光技术的原理方法以及应用现状,接着分析了增材制造技术和表面抛光技术的发展趋势,最后进行了总结和展望。
语言景观是指某空间范围内所有可视的语言标牌,在最近二十年里,语言景观研究逐渐成为社会语言学方向的一个重要研究领域。语言景观研究着重考察现实世界中的语言景观如何通过语言与空间的互动来体现语言权势。武汉光谷步行街是国际化的购物中心,位于高校林立的武昌(武汉)光谷核心区域。该街区店铺鳞次栉比,语言景观丰富,因而更能真实反映该地区的社会语言实态、语言生态和文化生态。国内语言标牌的研究重点主要集中在语言规范
2001年安然事件爆发后,美国国会颁布了《SOX法案》,强烈要求对上市公司进行内控审计,之后日本等国家也相继出台了内部控制的相关法规。为了符合国际资本市场监管要求,同时也为了让国内企业的内部控制充分发挥有效作用,2008年,我国财政部等部门发布了《企业内控基本规范》,2010年发布了《企业内控配套指引》。2011年以后我国还发布了一系列实操性文件,如中注协发布的《企业内控审计指引实施意见》、证监会
混合电容器(HCs),特别是锂离子混合电容器(LIHCs),被认为是锂离子电池(LIBs)一种较好的替代品。通常,混合电容器是由具有电池性质的负极和电容性质的正极组成,从而具有高能量密度、高功率密度和优异循环稳定性能等优点。然而,LIHCs在未来储能器件中的进一步发展在很大程度上受限于锂资源的稀缺和分布不均。因此,与LIHCs具有类似的电化学行为的钠离子混合电容器(SIHCs)和钾离子混合电容器(