本实验室通过LUC发光成像系统筛选出四个化学发光的突变体heat1,enpig1,enpig 2,bs1,除此之外还得到了突变体flo2,在前期研究工作里,heat1突变体表现出热敏感的表型,enpig1和enpig2突变体显示出外源基因表达增强的表型,bs1突变体则显示病敏感的表型,flo2突变体则呈现早花的表型。HEAT1、ENPIG2是被证实是剪接因子相关蛋白,而ENPIG1是剪接体相关蛋白,而BS1蛋白功能未知。本人通过酵母双杂交实验进行文库筛选,得到了与以上蛋白可能有相互作用的蛋白,再利用酵母点对点、双分子荧光互补实验对这些结果进行了进一步的验证。对于FLO2蛋白而言,其并非一个核蛋白,文库筛选得到了 12个在阅读框内的蛋白质,调控开花的蛋白质有两个(LD,BRR2),这两个互作蛋白参与开花抑制因子FLC的调控和的在点对点验证中,证实FLO2与其所在家族的另一个蛋白FLO1,和V1、V2蛋白分别存在互作,在后面对FLO2和V1进行了功能结构域的探究实验,FLO2蛋白的B2、Vast1部分与V1蛋白有相互作用,V1蛋白的C部分与FLO2蛋白相互作用。以HEAT1为钓饵蛋白,进行文库筛选后得到25个正确表达的蛋白质,其中有5个定位在细胞核内,这些蛋白中有个蛋白与mRNA的剪接有关,HEAT1可能通过调控mRNA的剪接来调控抗热机制。再利用BiLC手段进一步验证,得到有4个蛋白与HEAT1存在相互作用,其中有参与病调控的蛋白JAZ1,参与开花调控的蛋白NF-YC4 等。由于ENPIG1已经验证到为核蛋白,因此在经过实验测序比对后得到了 29个表达正确的蛋白,其中定位在核内的蛋白共有22个,这些蛋白的功能各式各样,有些是组成型蛋白,也有调控剪接的剪接因子,还有通过表观修饰来调控开花的蛋白,这与之前发表的结果符合。通过不同手段进行点对点验证后,发现ENPIG1是与六个蛋白存在相互作用的,其中有两个是与表观遗传的蛋白(SUVH2和DMS3)这为ENPIG1调控外源基因的表达提供了方向,三个则是参与mRNA的剪接(SR45a,SCL33,ATSF1)这与前期的报道一致,除此之外还有参与调控盐胁迫的蛋白(ATP1)。ENPIG2蛋白也是一个定位在核内的蛋白,在文库筛选工作中,得到34个在阅读框内的蛋白,其中有14个蛋白为核蛋白,其中存在一个蛋白(RPT2A)涉及表观遗传调控,rpt2a突变体在调控外源基因表达上的表型与enpig1完全相反,这可能证明前者在负向调控后者。除此之外,前人已验证到ENPIG2与9个表观遗传调控的蛋白具有相互作用,本人通过酵母双杂交的方式,证实了 ENPIG2主要功能域为M1。BS1在前期已经过酵母文库筛选过程,我利用BiLC对BS1与不同表观遗传相关蛋白进行互作验证,验证到BS1与SUVH9,DRM2有相互作用,这两个蛋白都是参与DNA甲基化的重要蛋白,这可能证实了 BS1可能通过表观遗传的方式来调控相关下游基因的表达从而调控抗病机制。