透明质酸促进巨噬细胞吞噬的作用机制研究

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目的:研究透明质酸(hyaluronan,HA)对巨噬细胞吞噬功能的影响,探讨CD44介导HA作用的机制。 方法:从SD大鼠腹膜腔分离巨噬细胞,用RPMI1640培养。用免疫荧光染色法标记巨噬细胞的CD44,在荧光显微镜下观察CD44在巨噬细胞的分布。在噬动轨迹实验,将巨噬细胞接种在预涂不同细胞外基质和铺有氯化金颗粒的盖玻片上。细胞吞噬颗粒后,用图像分析仪测量细胞周围的无颗粒轨迹面积,并在扫描电镜下观察细胞的形态。用CD44阻断抗体处理细胞后,观察细胞吞噬氯化金颗粒的变化。在吞噬荧光微珠实验,荧光显微镜下计数巨噬细胞吞噬的荧光微珠数。阻断细胞表面的CD44后,观察细胞吞噬荧光微珠的变化。用4%多聚甲醛固定细胞后,再用phallacidin标记吞噬微珠细胞的F-肌动蛋白,共聚焦激光扫描显微镜下观察吞噬荧光微珠处细胞内F-肌动蛋白的分布。在吞噬HA包被微珠实验,利用氨基与羧基之间的缩合反应使HA结合于氨基化修饰的微珠表面。用SABC-FITC标记微珠表面的HA。计数细胞吞噬HA包被微珠的数量,将包被HA组与CD44阻断组比较。在扫描电镜下观察细胞吞噬微珠处的形态。共聚焦激光扫描显微镜下观察吞噬HA包被微珠处细胞内Ca2+水平。 结论:底物HA和微珠表面HA均能促进巨噬细胞的吞噬。HA对于巨噬细胞吞噬的促进作用是通过其受体CD44所介导的。F-肌动蛋白和细胞内Ca2+水平参与HA促进的巨噬细胞吞噬活动。
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