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研究背景阿尔茨海默病(AD)的神经病理学特征包括老年斑、神经原纤维缠结和突触丢失。AD造成的原因至少部分是由β淀粉样蛋白(Aβ)蛋白产生和和清除障碍失衡,从而导致Aβ积累在中枢神经系统(CNS)。二十二碳六烯酸(DHA)是一种重要的多不饱和脂肪酸(PUFA),临床前研究和临床研究表明,DHA对包括AD在内的几种神经退行性疾病具有神经保护作用。与单核细胞相比,小胶质溶酶体酶活性水平较低,降解Aβ斑块的能力有限。单核细胞在AD的清除中起到至关重要的作用。因此还需要更多的研究来阐明DHA如何通过单核细胞促进Aβ清除潜在清除机制。程序性坏死(Necroptosis)由RIPK1、RIPK3和MLKL调节。不同于细胞凋亡以及传统细胞坏死的细胞死亡方式,其涉及包括AD在内的多种神经退行性疾病。NF-κB在调节免疫和炎症反应起着关键的作用,而蛋白激酶MAPKs是参与包括细胞生存、细胞凋亡和细胞对炎症的反应关键调节因素。同时,程序性坏死通路和MAPKs、NF-kB在单核细胞中的信号通路的潜在相互机制需进一步研究。研究目的本研究的目的是进一步探讨单核细胞与Aβ相互作用的可能机制及DHA所涉及的机制。同时,进一步研究DHA是否能降低Aβ通过THP-1细胞对神经元的间接毒性作用。研究方法1、CCK-8法检测THP-1单核细胞、SY5Y及原代神经元的细胞活性。2、LDH法检测THP-1单核细胞的细胞毒性。3、流式分析THP-1单核细胞的分化及凋亡/坏死。4、迁移实验评估THP-1单核细胞的迁移能力。5、免疫印迹分析(Western blot analysis)检测THP-1细胞的蛋白表达水平。研究结果1、CCK-8及LDH结果显示Aβ25-35对THP-1单核细胞的细胞活性有“Hormesis”效应。2、流式分析结果显示Aβ25-35对THP-1单核细胞程序性坏死有“Hormesis”效应,并影响THP-1细胞的分化。3、CCK-8显示DHA抑制Aβ25-35通过THP-1单核细胞对SY5Y及原代神经元细胞的激活。4、细胞迁移实验表明DHA恢复Aβ25-35刺激的THP-1单核细胞迁移能力的下降。5、DHA 能抑制 Aβ25-35 刺激的 THP-1 单核细胞 IL-6、TNF-α、IL-1β、MLKL、RIPK1、RIPK3的蛋白表达水平及ERK1/2的磷酸化蛋白表达水平,而不影响P65、P38的蛋白表达水平。6、DHA通过RIPK1抑制Aβ25-35刺激的THP-1单核细胞RIPK3的蛋白表达及直接抑制Aβ25-35刺激THP-1单核细胞的ERK1/2的磷酸化的表达水平。结论1、Aβ25-35对THP-1单核细胞活性有双重影响,即“Hormesis”效应。2、Aβ25-35对THP-1单核细胞程序性坏死有“Hormesis”效应,并且Aβ25-35影响THP-1单核细胞的分化。3、DHA通过间接作用抑制Aβ25-35刺激的THP-1细胞介导的神经元激活。4、DHA恢复Aβ25-35刺激的THP-1单核细胞迁移能力的下降。5、DHA抑制Aβ25-35刺激的THP-1单核细胞RIPK1/RIPK3通路的程序性坏死和ERK1/2信号通路的激活。