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MiRNA是真核生物中基因表达重要调控因子之一。DNA病毒中也发现了大量的mi RNA分子,比如疱疹病毒、多形瘤病毒、囊泡病毒、腺病毒等。现发现病毒mi RNA分子可以通过基因沉默调控自身基因、宿主或两者基因的表达。过去几年中,从中国不同区域的中国大鲵驯养场,人们在中国大鲵病体上分离出一种DNA病毒,称为中国大鲵病毒(CGSV和ADIV)。2011年我们从湖南张家界中国大鲵驯养场患病的中国大鲵体内也分离出一株病毒,称中国大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,CGSIV)。这些病毒能导致驯养的中国大鲵产生严重的疾病和致死。CGSIV已被鉴定属于虹彩病毒科蛙病毒属两栖类蛙病毒CMTV组。在原先的工作中,我们展开了CGSIV功能基因组的研究。CGSIV基因组全长10,6366 bp,G+C含量约为55%,含有112个ORFs,其中26个为虹彩病毒核心基因序列。本课题为进一步研究CGSIV分子生物学机制,探索了病毒编码的mi RNA前体序列信息和功能。在研究中,我们采用了VMir和Mi Pred两个病毒mi RNA前体预测软件来分析CGSIV基因组上可能编码mi RNA前体序列。两个软件预测产生了19个可能的CGSIV mi RNA前体序列。应用RNAfold程序对上述筛选出的CGSIV基因组编码的mi RNA分子前体序列进行分析,预测其二级结构。预测的14个mi RNA前体编码序列位于CGSIV编码的蛋白基因内,其中9个mi RNA序列位于基因的反义链上。这意味着这些基因可能是mi RNA的靶基因。CGSIV的一个mi RNA前体即MD272编码序列位于病毒ORF019L基因的反义链。ORF019L基因编码主要衣壳蛋白(MCP)。MCP是病毒粒子蛋白重要蛋白之一。MD272可能调控MCP基因蛋白的表达。为了进一步研究MD272是否在病毒感染后被转录,采用了RT-PCR技术检测病毒感染EPC细胞后的RNA分子。实验显示MD272表达的mi RNA前体在病毒感染细胞4小时后被检测出来。MCP蛋白是病毒感染的必需蛋白,MCP的基因沉默将干扰病毒的复制。我们设计了与MD272相同序列的si RNA(mi R-MCP),进行CGSIV病毒MCP干扰实验。实验结果显示在低MOI的情况下,mi R-MCP能有效干扰CGSIV MCP的表达,并使病毒复制在感染24 h后降低到70%,感染48 h后降低到50%。Western bolt实验进一步证明了mi R-MCP的干扰MCP基因表达。通过本研究,我们预测出了CGSIV编码的mi RNA前体序列,其中含有可能作用于MCP基因的mi RNA前体(MD272),并经RT-PCR验证存在于病毒转录产物中。与该条序列一样的人工设计的干扰RNA能有效沉默基因MCP表达,表明了mi RNA可能在病毒复制调控中起作用,但具体的生理功能需要进一步的研究。