基于高通量测序技术的朱砂叶螨抗性相关基因分析

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朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)是农业生产上重要的世界性害螨,极易产生抗药性。然而,该物种基因信息的缺乏一直是人们对这一物种抗药性机制研究的一大阻碍。因此,我们采用高通量测序技术对朱砂叶螨进行转录组和数字基因表达谱(升级版)测序,以扩展该物种的基因信息资源,为抗药性研究奠定分子基础。本研究所获得的主要研究成果如下:1.通过对朱砂叶螨的转录组测序,共获得了该物种45,016条contigs和25,519条unigenes。通过对nr, nt, SwissProt, the Clusters of Orthologous Groups (COGs), Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)和Gene Ontology (GO)等数据库的BLAST收索(E-value<0.00001),最后共有15,167条unigenes被注释。2.通过在数据库中手动查找,从朱砂叶螨转录组中共归纳、整理了10类与杀虫剂抗药性有关的基因,分别为细胞色素P450基因(53条),谷胱甘肽硫转移酶基因(24条),羧酸酯酶基因(22条),三磷酸腺苷酶基因(与抗药性有关的13条),乙酰胆碱酯酶基因(3条),伽马氨基丁酸受体基因(16条),钠离子通道基因(1条),谷氨酸氯离子通道基因(6条),烟碱型乙酰胆碱受体基因(10条)和细胞色素b基因(13条)。3.通过对朱砂叶螨敏感和甲氰菊酯抗性品系的数字基因表达谱测序,分别获得清楚阅读7,456,152条和7,072,453条。差异表达基因23,368条,其中有11,090条上调基因和12,278条下调基因。显著差异基因(FDR<0.001且log2Ratio≥1)有350条,其中上调和下调基因分别为137和213条。随机挑选20条显著差异基因序列进行qRCR定量验证,证实本次表达谱的准确率为85%。GO功能显著性富集分析显示显著富集的GO term共有31个。Pathway显著性富集分析显示显著富集的Pathway共有122条。这些GO term和Pathway里所包含的基因很可能与甲氰菊酯抗性密切相关。4.对表达差异显著基因筛选,发现5条可能与甲氰菊酯代谢抗性相关的解毒酶基因,分别为2条细胞色素P450基因(Unigene12824_A和Unigene20528_A)、2条羧酸酯酶基因(Unigene9913_A和Unigene12325_A)和1条谷胱甘肽硫转移酶基因(Unigene9401_A)。之后分别对这5条基因进行表达模式聚类和Pathway分析,进一步分析和预测了这5条基因参与朱砂叶螨对甲氰菊酯抗药性形成的方式。
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