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[目的]
观察P物质(SP)、NK1受体拮抗剂和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂对体外培养的人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞一氧化氮(NO)分泌和诱导型NOS(iNOS)表达的影响,探讨SP对HaCaT细胞一氧化氮合成的作用机制。
[方法]
1.人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞培养至五代后,观察不同浓度SP(10-9~10-6mol/L)处理后30 min、1h、3 h、6 h、12 h、24 h,用硝酸还原酶法测定上清液中NO含量。
2.HaCaT细胞中分别加入10-8mol/L SP、10-8mol/L SP+3×10-7mol/Lspantide,30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h后测定NO水平。
3.HaCaT细胞中分别加入10-8 mol/L SP、10-8mol/L SP+10-7mol/L氨基胍、10-8mol/L SP+10-6mol/L7-硝基吲唑、10-8mol/L SP+10-5mol/L L-NAME,30min、1 h、24 h后测定NO水平。
4.HaCaT细胞中加入10-8mol/LSP,1h、24h、48 h后用RT-PCR检测iNOSmRNA表达。
[结果]
1.SP组HaCaT细胞NO水平明显高于对照组(P<0.0001),其中10-8mol/L SP刺激HaCaT细胞分泌的NO量最高;各组在不同时间点上差别亦有统计学意义(P<0.0001),以SP处理后1 h的NO分泌量最高。
2.spantide组HaCaT细胞NO水平明显低于SP组(P<0.0001),二者在不同时间点上差别亦有统计学意义(P<0.0001)。
3.L-NAME组HaCaT细胞NO水平在3个时间点上均明显低于SP组(P<0.05),7-硝基吲唑组与SP组在30 min、1h差别有统计学意义(P<0.05),而氨基胍组与SP组在各个时间点上差别均无统计学意义(P>0.05)。
4.SP处理后24 h、48 h可见HaCaT细胞表达iNOS mRNA,其中以48 h较为明显(P<0.0001)。
[结论]
1.10-9~10-6mol/L SP可诱导HaCaT细胞分泌NO,其中以10-8mol/L SP效应最明显。
2.Spantide对SP诱导HaCaT细胞分泌NO起抑制作用,提示SP通过激活细胞内的NK1受体诱导细胞分泌NO。
3.7-硝基吲唑、L-NAME对SP诱导HaCaT细胞分泌NO起抑制作用,但氨基胍无明显抑制作用,提示cNOS在SP诱导HaCaT细胞分泌NO中起主要作用。
4.SP可诱导HaCaT细胞表达iNOS mRNA,但其表达上调时程与NO生成时程无关。