AcMNPV抑制HaSNPV诱导的Tn-Hi5细胞凋亡机制及其分子机理研究

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杆状病毒是一类寄生于节肢动物的杆状的病原微生物,宿主大多为昆虫和某些甲壳类动物。由于其对人体无害,又是一种高效的真核表达载体,作为一种高效的生物杀虫剂及真核表达载体而得到广泛的应用。自从在杆状病毒中首次发现P35,一种广谱的凋亡抑制蛋白,并且其后又发现IAP,一种进化上高度保守的凋亡抑制蛋白的发现,杆状病毒为研究宿主对病毒入侵的凋亡反应提供了一个理想的系统。杆状病毒感染非敏感细胞常常可以导致细胞凋亡,棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒(Helicoverpa armigera Nucleopoly-hedrovirus,HaSNPV)能够诱导粉纹夜蛾Tn-Hi5细胞发生凋亡,这种凋亡能够被野生型和缺失了凋亡抑制基因p35的苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica multicapsid nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)所抑制,并且在AcMNPV的辅助下,HaSNPV能够在Tn-Hi5细胞中复制,产生具有感染能力的子代病毒。对于AcMNPV基因组中属于凋亡抑制蛋白(IAP)家族的两个基因:Aciap1和Aciap2的研究发现:瞬时表达实验证明,在Tn-Hi5细胞中,Aciap2能部分拯救由HaSNPV所诱导的细胞凋亡, Aciap1则没有表现抑制细胞凋亡功能;,p35作为阳性对照具有明显抑制凋亡的能力。进一步通过Bac-to-Bac系统构建分别超表达p35,Aciap1和Aciap2基因的重组HaSNPV病毒,以进一步研究AcMNPV IAP的功能,并希望获得宿主范围扩大了的重组病毒。结果发现含有p35和iap2基因的重组病毒可以抑制Tn-Hi5细胞凋亡,电镜观察发现感染重组病毒的部分细胞中存在单粒包埋的病毒粒子(ODV),但不能产生具有感染性的BV。首次证明Aciap2具有抑制细胞凋亡的功能, 能部分拯救HaSNPV在Tn-Hi5细胞中复制。而含有Aciap1的重组HaSNPV仍然诱导Tn-Hi5细胞凋亡,Aciap1基因没有表现抗细胞凋亡的功能。
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