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固定化酶是二十世纪七十年代迅速发展起来的一个新的科技领域。它的产生和发展不仅打破了生物化学的传统概念,也给工业革命带来了强大的动力。本文工作旨在用两种不同的方法对木瓜蛋白酶进行固定化,同时以酪蛋白为底物,研究了固定化条件对酶活力回收的影响,并比较了固定化酶和溶液酶的动力学性质。 首先,以硅胶为载体,γ-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷为偶联剂,对木瓜蛋白酶进行了固定化。最适固定化条件如下:温度为25℃,pH为8.0,时间为18 h,酶量为每克环氧化硅胶固定化240mg酶。同时以酪蛋白为底物,研究了固定化条件对酶活力回收的影响,并比较了固定化酶和溶液酶的动力学性质,结果表明:固定化酶的最适pH值和最适温度都比溶液酶有所提高,且有较好的操作稳定性。 重氮化法是固定化酶的一种重要方法,在用多孔玻璃等无机载体时,一般是先用γ-氨丙基三乙氧基硅烷与多孔玻璃等载体反应,生成烷基胺玻璃,然后与对硝基苯酰氯反应,产物经还原,转变为带有芳胺的衍生物,再进行重氮化。本文以硅胶为载体,与γ-氨丙基三乙氧基硅烷反应后,再和对氨基苯甲酸反应,直接生成芳胺的衍生物,通过在新合成的载体上对木瓜蛋白酶进行固定化,研究了固定化条件对酶活力回收的影响,最适固定化条件如下:pH为7.0,时间为6h,酶量为每克载体固定化288mg酶,并比较了固定化酶和溶液酶的有关性质,考察了固定化酶的操作稳定性。结果表明,用这种方法合成的载体固定化酶,其对热稳定性、操作稳定性及产率都比较理想。