植物中已经克隆出来的抗病基因大多数包含NBS-LRR结构域,这类基因经常以簇的形式存在于基因组中,其中有功能的抗病基因会与其相应病原体的无毒基因作用,发生程序性细胞死亡(即过敏反应),从而限制病原物的扩散来保护植株的其它部位不受侵染。本实验以烟草野生种为对象,研究接种苗龄、农杆菌浓度、乙酰丁香酮浓度和培养温度等四个方面对11种烟草野生种VIGS(virus induced gene silencing, VIGS)沉默效率的影响,优化最合适的VIGS沉默体系：研究表明,在烟草苗龄6叶(出苗后生长20～25天),侵染的农杆菌OD600值0.6,AS浓度为400mmol/L,培养环境为22℃,16h黑暗；18℃,8h光照条件下,可以获得VIGS沉默的最佳效果。此外,本研究在该条件下对另外14种烟草野生物种VIGS沉默效率也进行了研究。同时根据茄科中已知的抗病基因的序列设计引物,在Nicotiana alata中扩增,进而构建pTRV系统病毒诱导的基因沉默(VIGS)载体。本研究共构建了113个载体,覆盖了茄科中所有已知的抗病基因家族。利用已知功能的人7基因,对该系统进行验证,结果表明其中的N基因家族沉默载体有效地沉默了N. benthamiana中的对烟草花叶病毒(TMV)抗性。该套VIGS载体有望用于分析烟草属中NBS-LRR编码的各种抗性,并快速克隆抗病基因,从而为烟草、番茄、马铃薯等作物提供新的抗性资源。