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[目的]激活转录因子2(activating transcription factor 2,ATF2)是碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,b ZIP)家族成员,在不同肿瘤的发生和发展当中,ATF2发挥抑癌和促癌的双重作用。研究报道其在调节参与应激、DNA损伤应答和转录调控基因和蛋白方面均发挥重要作用。然而,在肾脏肿瘤的相关研究中,ATF2的作用鲜有报道。本课题旨在通过抑制ATF2基因的表达,探究其对肾癌细胞系表型的影响,并结合临床资料研究其相关的临床意义。[研究方法]1、通过qRT-PCR(quantitative real-time,PCR)方式验证肾癌细胞系与正常肾脏细胞系,癌旁组织和癌组织,癌组织和癌栓组织中ATF2 mRNA的表达差异。2、构建针对ATF2基因的三条si RNA(small interfering RNA,si RNA)敲减序列,并通过qRT-PCR方式验证其敲减效率从而筛选敲减效率最强的一条序列制备慢病毒介导的ATF2 sh RNA(short hairpin RNA,sh RNA),并再次在mRNA和蛋白水平验证其敲减效率。3、通过细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭实验验证ATF2敲减对肾癌细胞系786-O和ACHN的影响。同时利用qRT-PCR和Western blot技术检测影响细胞增殖和转移相关基因的表达。裸鼠皮下荷瘤实验再次验证ATF2敲减对肾癌细胞增殖的影响。4、利用免疫组化和组织芯片技术,探究ATF2在肾癌组织中的表达情况,并结合临床资料研究其对患者生存和预后的意义。[结果]1、qRT-PCR结果表明ATF2 mRNA在肾癌细胞系中的表达高于正常肾脏细胞系,临床样本中结果表明其在癌组织中高表达,且相较于癌组织,癌栓组织中ATF2 mRNA表达水平更高。2、qRT-PCR和Western blot结果表明构建的ATF2 sh RNA能够有效的敲减ATF2在mRNA和蛋白水平的表达,敲减效率在90%以上。3、相较于对照组,ATF2敲减组肾癌细胞在增殖活性,迁移和侵袭能力方面均明显降低。ATF2 sh RNA敲减组细胞凋亡增加,细胞周期出现G0/G1期阻滞。qRT-PCR和Western blot结果显示,ATF2敲减后Cyclin B1,Cyclin D1,Snail和Vimentin基因的表达受到抑制,E-cadherin的表达升高。裸鼠皮下荷瘤实验显示实验组肿瘤生长明显受到抑制。4、组织芯片免疫组化染色结果分析,ATF2在肾癌组织中高表达,ATF2的表达与肾癌患者肿瘤的大小,有无癌栓,有无转移相关。高表达ATF2肾癌患者的总体生存期和无进展生存期明显较短。[结论]慢病毒敲减ATF2使其在mRNA和蛋白水平表达明显受到抑制,ATF2通过调控Cyclin B1,Cyclin D1,Snail,Vimentin和E-cadherin基因的表达影响肾癌细胞的增殖和转移。结合临床资料分析ATF2可能作为判断患者预后的生物学指标。