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目的通过细菌培养、电镜技术、PCR扩增螺杆菌属16SrRNA基因和相关功能基因等分子生物学技术,探讨螺杆菌感染与人类原发性肝癌(HCC)的相关性。方法1、选取38例HCC患者的肝癌组织为实验组,28例其他肝病患者肝组织和29例胃癌患者胃癌组织、18例结直肠癌、18例子宫肌瘤作对照组。2、应用哥伦比亚培养基分离培养癌组织中的螺杆菌,并对培养阳性标本进行G染色、投射电镜(TEM)观察和尿素酶检测鉴定,扫描电镜(SEM)观察癌组织中细菌形态、位置。3、采用聚合酶链反应(PCR)检测螺杆菌属16SrRNA基因,用螺杆菌属特异探针、Hp、Hh和Hf种特异性16SrRNA-cDNA探针对各组16SrRNA的扩增产物经Southern杂交确认,并进行测序及同源性比较。4、检测Hp的特异基因26-kDa及相关功能基因cagA、vacA、rps4、glmM。通过以上方法综合评价螺杆菌感染与HCC的相关性。结果1、肝癌组培养出1株螺杆菌,分离阳性率2.6%,胃癌组6株,分离阳性率20.7%。经革兰染色、电镜、尿素酶、16SrRNA基因检测和序列测定结果证实为Hp感染。扫描电镜观察到2例肝癌标本中有细菌存在于肝细胞之间,球形菌明显多于杆状菌,4例胃癌组织中观察到有细菌粘附于胃窦表面上皮细胞之间。2、原发性肝癌标本中有27例检出螺杆菌属16SrRNA基因(27/38),阳性率为71.1%;胃癌标本有23例检出螺杆菌16SrRNA(23/29),阳性率为79.3%。其他对照组未扩增出16SrRNA基因。PCR产物经Southern杂交证实为Hp,HCC组与胃癌组对比无显著性差异(P＞0.05),而与其他对照组比较有统计学意义(P＜0.01)。3、序列测定表明,螺杆菌16SrRNA序列与Hp序列有97.80%的同源性。Hp相关功能基因扩增结果表明,26-kDa基因阳性45份(45/57),扩增阳性率78.95%;glmM基因阳性9份(9/57),扩增阳性率15.79%;cagA基因阳性11份(11/57),扩增阳性率19.30%,均未扩增出vacA和rps4基因,Hp的基因型可能多为Ⅱ型,而少数为Ⅰ型。结论1、HCC患者肝组织中存在螺杆菌感染且感染率较高。2、螺杆菌感染与原发性肝癌可能存在相关性。