【摘 要】
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目的：近年来的研究表明,酪蛋白激酶Ⅰα（Casein Kinase 1 alpha, CKlα）与肿瘤的发生发展关系密切。通过RNA干扰技术特异沉默CK1α基因,体外研究其对A549细胞生长增殖的影响,为进一步研究CK1α基因在肺癌中的作用提供参考。方法：构建三个针对CK1α基因不同位点的短发夹表达载体及一个无义错配载体,分别转染A549细胞,并用G418筛选出阳性克隆,通过RT-PCR和West
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目的：近年来的研究表明,酪蛋白激酶Ⅰα（Casein Kinase 1 alpha, CKlα）与肿瘤的发生发展关系密切。通过RNA干扰技术特异沉默CK1α基因,体外研究其对A549细胞生长增殖的影响,为进一步研究CK1α基因在肺癌中的作用提供参考。方法：构建三个针对CK1α基因不同位点的短发夹表达载体及一个无义错配载体,分别转染A549细胞,并用G418筛选出阳性克隆,通过RT-PCR和Western blotting分别检测CK1α基因的mRNA和蛋白表达。通过细胞计数绘制细胞生长曲线,通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果：实验成功构建了pGenesil-shRNA表达质粒,并且该质粒明显下调A549细胞CK1α的表达,A549-S1、A549-S2及A549-S3 mRNA水平的抑制率分别为84.3%、57.9%和61.8%（P<0.001）；蛋白质水平的抑制率分别为78.4%、51.3%和59.9%（P<0.001）。选择干扰效率较高的A549-S1进行后续实验。细胞计数和CCK-8增殖实验结果显示,A549-S1与A549和A549-NK两对照组的平均值比较,A549-S1的增殖受到明显抑制,其细胞计数抑制率为37.7±2.2%（P<0.01）；CCK-8抑制率为26.2±1.5%（P<0.05）。流式细胞仪结果显示,A549-S1的S期和G2／M期细胞数明显少于A549和A549-NK两对照组的平均值,S期减少75.0±4.0%（P<0.01）；G2／M期减少45.2±5.4%（P<0.05）。结论：CK1α基因的沉默可明显抑制A549细胞的生长和增殖,且细胞被阻滞在G0／G1期。
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