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食管癌是严重危害人类身体健康的消化道恶性肿瘤之一,发病率居中国恶性肿瘤发病率的第5位,死亡率居第4位,其预后差,5年生存率小于25%。目前化疗是治疗食管癌的手段之一,然而,多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是阻碍化疗成功的主要障碍,特别是对于复发性肿瘤。由于肿瘤治疗效果由耐药性决定,因此MDR已经成为研究的焦点。本课题的研究对象是人食管癌耐药细胞株Eca-109/VCR,研究沉默MDR1基因对人食管癌细胞Eca-109/VCR多药耐药的影响,主要涉及对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,以初步探索其可能作用机制。通过CCK-8法检测RNA干扰技术对Eca-109/VCR的毒性作用;通过流式细胞术观察RNA干扰技术诱导细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR技术和免疫细胞化学分别测定转染前后细胞MDR1 mRNA及P-糖蛋白(P-gp)表达的变化。通过上述研究探讨一下几个问题:探讨RNA干扰技术联合VCR能否抑制食管癌耐药细胞株的增殖;探讨RNA干扰技术联合VCR是否能够抑制Eca-109/VCR细胞膜表面的P-gp,以初步探讨其逆转耐药的分子机制。结果发现,3.0μg/ml、3.5μg/ml、4.0μg/ml的VCR作用于Eca-109/VCR细胞24h后,Eca-109/VCR细胞的生长抑制率为(38.89±0.25)%、(50.61±0.69)%、(52.36±0.60)%,差异具有显著性(P<0.05),对癌细胞无明显毒性,而经过转染后的Eca-109/VCR细胞与3.0μg/ml、3.5μg/ml、4.0μg/ml的VCR联用后,Eca-109/VCR细胞对VCR的敏感性增加,抑制率分别为(58.91±0.25)%、(77.30±0.50)%、(84.63±0.50)%;通过流式细胞术测得siRNA联合VCR组的Eca-109/VCR细胞的凋亡率较其他各组明显增高;实时荧光定量PCR技术研究结果发现RNA干扰技术联合VCR组的MDR1基因表达量为19%,较单独应用VCR组显著下降(P<0.05);免疫细胞化学法研究发现RNA干扰技术联合VCR组作用后,Eca-109/VCR细胞膜表面的P-gp表达均有强阳性转为弱阳性。研究结果表明,RNA干扰技术联合VCR对人食管癌耐药细胞株的耐药性具有显著逆转作用,能够显著增强Eca-109/VCR细胞对VCR的敏感性,其逆转机制可能是抑制P-gp的表达,减少化疗药的外排,进而增强机体的抗肿瘤作用,增强食管癌耐药细胞株对化疗药物的敏感性,为食管癌患者打开临床治疗的新世界。