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目的:观察并验证急性抗Thy-1系膜增生性肾炎大鼠系膜细胞焦亡的发生情况。在此基础上,观察中药槐耳对上述系膜细胞焦亡的调控作用并对其调控机制进行探讨。方法:用前期试验采集到的抗Thy-1系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾脏的石蜡和组织标本进行研究,采用免疫组化和western blot方法检测焦亡标志蛋白GSDME及其上游蛋白cleaved caspase-3的表达。采用HBZY-1大鼠系膜细胞系开展体外研究,观察并验证OX7抗体结合正常大鼠血清是否能诱导HBZY-1出现损伤,运用下列指标评价HBZY-1的损伤和焦亡,包括光镜下观察细胞形态,免疫荧光检测细胞表面抗体的表达,MTT检测细胞活性,LDH检测细胞的损伤和western blot检测蛋白PARP及cleaved caspase-3的表达。随后检测炎症因子IL-18,IL-1 β、MCP-1的表达。进一步用western blot和免疫荧光验证焦亡标志蛋白GSDME的表达。再验证甲基化转移酶DNMT3B是否能下调HBZY-1细胞被OX7抗体结合正常大鼠血清升高的GSDME的表达。采用不同剂量槐耳清膏(lmg/ml,5mg/ml,1Omg/ml)千预被OX7抗体结合正常大鼠血清诱导损伤的HBZY-1细胞,同样光镜下观察细胞形态,检测LDH释放率、PARP、cleaved caspase-3、IL-18,IL-1β、MCP-1及GSDME的表达。再用去甲基化制剂5-aza-2’-deoxycytidine干预HBZY-1细胞,观察其对细胞的状态的影响,对GSDME表达的影响以及槐耳干预后的影响。结果:在抗Thy-1系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾脏石蜡切片和组织中,肾小球的GSDME和cleaved caaspase-3表达呈阳性,并随着疾病的发展而发生变化。体外细胞实验中,细胞形态学观察,LDH测定,IF和免疫印迹的结果证实,HBZY-1在OX7抗体加正常大鼠血清刺激下发生损伤。HBZY-1裂解后可释放出炎症因子IL-18,IL-1 β和MCP-1。由于GSDME呈阳性,提示HBZY-1的损伤为焦亡。甲基化转移酶DNMT3B可使被OX7抗体加补体上调的GSDME下调。给予槐耳清膏干预后,HBZY-1细胞损伤减少,炎症因子IL-1 β、MCP-1等释放减少,GSDME的表达降低。而5-aza-2’-deoxycytidine可增加大鼠系膜细胞的焦亡,上调GSDME的表达,并使被槐耳下调的GSDMli的表达再次升高。提示槐耳通过增强HBZY-1的甲基化发挥抗焦亡作用。结论:OX7抗体加补体可诱导大鼠系膜细胞发生焦亡,而中药槐耳可保护大鼠系膜细胞,避免焦亡的发生。大鼠系膜细胞焦亡的发生与细胞的去甲基化有关,而槐耳的抗焦亡作用与增强细胞的甲基化有关。提示在MsPGN的发病过程中可能也有系膜细胞焦亡的发生,且疾病所处的阶段可能与局部组织或细胞的甲基化程度有关。